[發明專利]“腎主骨”組織效應的鑒定方法

在審

• 申請號: 201711449708.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108179170A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 胡小東;趙翔;熊華強;宋彩霞
• 申請（專利權）人: 重慶斯德姆生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/31;G01N33/576;C12N5/077
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

本發明屬實驗方法領域，涉及一種用體外細胞培養方式鑒定“腎主骨”效應的測定方法。該方法應用體外細胞培養的方式，將腎小球系足細胞直接作用于成骨細胞，在細胞水平觀察兩者的內在聯系。經實驗結果表明，本方法有效地避免了體內復雜的影響因素，將腎小球足細胞直接作用于成骨細胞，并在細胞水平觀察兩者內在聯系，證實腎足細胞能直接作用于成骨細胞，促進成骨細胞增殖；腎足細胞能直接作用于成骨細胞，促進成骨細胞分泌堿性磷酸酶。

技術領域

本發明屬于實驗方法領域，涉及體外細胞培養方法，具體涉及用體外細胞培養方式鑒定“腎主骨”效應的方法。

背景技術

“腎主骨”表明腎充養骨骼以及二者生理功面的聯屬關系。骨髓由腎精所化生，《素問.陰陽應象大論》指出腎生骨髓髓藏與骨腔之中，以充養骨骼，所謂“腎充則髓實”。

中醫“腎主骨”理論認為，腎與骨有著密切的關系，即腎能接受五臟六腑所傳之精封而藏之，充實于骨，濡養于骨，對骨的生長發育和維持骨的成分及結構正常具有重要作用，是人體骨代謝的內環境。機體攝入的有關骨代謝的物質能否充分利用，與腎臟的羥化酶系統及其他器官組織的生物活性物質的功能有著密切的關系。

骨組織的鈣化與鈣磷代謝有著直接的關系。鈣、磷被吸收到機體內并轉化成為骨鹽，維生素D起著決定性作用。它可調節鈣磷代謝，促進腸道鈣磷的吸收，同時也可增加腎小管對磷的重吸收，減少尿磷的排出，與甲狀旁腺素協同作用，促進骨基質的鈣化過程，使血鈣、血磷的濃度增加，以利于在骨內沉積。但維生素D必須在體內轉變為有活性的膽骨化醇(維生素D2)和麥角鈣化醇(維生素D2)才能發揮其對骨的作用。

腎對鈣、磷代謝具有調節作用，其調節機制是通過腎小管加強對鈣的重吸收，并從尿內排出大量的磷，以維持血漿內鈣、磷的動態平衡。這種排磷保鈣的生理調節功能，可適應骨骼的生長發育和骨損傷修復的需要。當這種調節功能發生障礙時，可因體內鈣的大量丟失、骨骼鈣的不斷減少導致骨質疏松。故腎對鈣、磷代謝的調節功能直接影響著骨代謝，從而體現了與中醫“腎主骨”理論的一致性。

其次，由甲狀腺及甲狀旁腺分泌的降鈣素(CT)可抑制破骨細胞的活性，促使生骨細胞變為成骨細胞，促進生骨作用。甲狀旁腺分泌的甲狀旁腺素可促使生骨細胞變成破骨細胞，促進溶骨作用，增加骨鈣重吸收。此外，由垂體所分泌的生長激素和卵巢、睪丸分泌的性激素均參與人體的生長發育、生殖及骨和軟骨的生成、代謝、修復。這與“腎主骨”理論中關于腎藏精，促進機體的生長發育和生殖，調節機體的代謝生理功能活動的觀點相吻合。這些由各內分泌腺所分泌的相關激素，也是中醫“腎主骨”理論的重要物質基礎。

胚胎學等方面的研究證實，腎與骨均發生于中胚層，屬于同源器官；腎小球足細胞是腎小球的主要固有細胞之一，具有分泌多種生物活性物質的功能；成骨細胞來源于骨髓間充質干細胞，是骨形成過程中的重要功能細胞，其主要功能是分泌骨基質，不僅與骨的形成密切相關，且在骨吸收過程中也起關鍵性作用；所述的成骨細胞對骨組織的生長發育、骨代謝平衡、骨量維持和損傷修復起關鍵作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種用體外細胞培養方式鑒定“腎主骨”效應的方法，該方法應用體外細胞培養的方式，將腎小球足細胞直接作用于成骨細胞，在細胞水平觀察兩者的內在聯系。所述的方法能鑒定腎小球足細胞直接作用于成骨細胞的效應，為證實中醫“腎主骨”的理論提供現代科學理論依據。

本發明還提供了建立所述方法的步驟及其用途。