[發(fā)明專利]“腎主骨”組織效應(yīng)的鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711449708.5
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108179170A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡小東;趙翔;熊華強(qiáng);宋彩霞
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶斯德姆生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/31;G01N33/576;C12N5/077
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

1.用體外細(xì)胞培養(yǎng)方式鑒定“腎主骨”效應(yīng)的方法，其特征在于，用含有腎小球足細(xì)胞培養(yǎng)上清液的培養(yǎng)液培養(yǎng)成骨細(xì)胞，測成骨細(xì)胞的增殖和堿性磷酸酶的濃度，在細(xì)胞水平分析成骨細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞的關(guān)系，鑒定腎主骨”效應(yīng)。

2.按權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，該方法包括步驟：

(1)分離培養(yǎng)腎小球足細(xì)胞和成骨細(xì)胞；

(2)用含有腎小球足細(xì)胞培養(yǎng)上清液的培養(yǎng)液培養(yǎng)成骨細(xì)胞；同時(shí)以含正常血清的培養(yǎng)液為對照組；

(3)測定成骨細(xì)胞增殖和堿性磷酸酶濃度。

3.按權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，免疫組織化學(xué)法顯示結(jié)蛋白表達(dá)呈陰性、角蛋白和WT-1表達(dá)呈陽性鑒定所述步驟(1)所得腎小球足細(xì)胞。

4.按權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(3)中，先用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)成骨細(xì)胞24h，然后分為正常血清組和足細(xì)胞組，正常血清組含10％的正常大鼠血清RPMI-1640培養(yǎng)液；足細(xì)胞組含20％的足細(xì)胞上清液的正常大鼠血清RPMI-1640培養(yǎng)液。

5.按權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，所述步驟(3)中，在酶標(biāo)儀上檢測成骨細(xì)胞光密度值，檢測波長490nm；ELISA法測定堿性磷酸酶，在450nm處測吸光值。

6.按權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于，所述的腎足細(xì)胞直接作用于所述的成骨細(xì)胞，促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，和促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌堿性磷酸酶。

7.權(quán)利要求1的用體外細(xì)胞培養(yǎng)方式鑒定“腎主骨”效應(yīng)的方法在制備成骨細(xì)胞培養(yǎng)液中的用途。