[發明專利]一種牛支原體藥敏快速檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201711447992.2
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108179172B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 張亮;楊宏軍;朱曼玲;王基隆;解曉莉;程凱慧;苗自利;呂亞妮;張云飛;楊美;劉來興
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院奶牛研究中心
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/35
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

1.一種牛支原體藥敏快速檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括牛支原體培養液、藥敏板和抗生素藥物；所述牛支原體培養液由以下成分及含量組成：PPLO粉10～15g，短肽2～4g，莫諾苷100～500mg，酵母粉2～6g，葡萄糖1～3g，丙酮酸鈉1 .5～4 .5g，MEM培養基80～120mL，1％(w/v)酚紅溶液2mL，馬血清100～300mL，30萬單位青霉素和ddH₂O 700～800mL；所述短肽為Tyr-Leu-Tyr-Glu-Val-Ala。

2.根據權利要求1所述牛支原體藥敏快速檢測試劑盒，其特征在于，所述牛支原體培養液由以下成分及含量組成：PPLO粉12g，短肽3g，莫諾苷300mg，酵母粉4g，葡萄糖2 .5g，丙酮酸鈉3 .5g，MEM培養基100mL，1％(w/v)酚紅溶液2mL，馬血清150mL，30萬單位青霉素和ddH₂O 750mL。

3.根據權利要求1所述牛支原體藥敏快速檢測試劑盒，其特征在于，所述藥敏板為96孔培養板，標有A～H號，每個號的1～12孔藥物濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0 .125、0，單位為μg/mL。

4.根據權利要求1所述牛支原體藥敏快速檢測試劑盒，其特征在于，所述藥敏板96孔培養板A-H號包被8種治療牛支原體藥物，這些藥物從以下大類藥物中篩出：大環內酯類、氯霉素類，氟喹諾酮類、氨基酸糖苷類和四環素類。

5.根據權利要求4所述牛支原體藥敏快速檢測試劑盒，其特征在于，篩選的8種治療牛支原體藥物分別為紅霉素、泰拉霉素、加米霉素、替米考星、氟苯尼考、諾氟沙星、卡那霉素和四環素。

6.根據權利要求1-5任一所述試劑盒的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

(1)牛支原體培養液的制備：將PPLO粉12g，短肽3g，莫諾苷300mg，酵母粉4g，葡萄糖2.5g，丙酮酸鈉3 .5g，溶于750mL ddH₂O中，加入MEM培養基100mL，1％(w/v)酚紅溶液2mL，116℃滅菌20min后，加入56℃滅活的馬血清150mL和30萬單位青霉素，調節PH值為7 .6～7.8，分裝至15mL培養管，9mL/管；

(2)藥敏板的制備：

S1 .將96孔板經粗洗、精洗、40℃恒溫烤干備用；

S2 .將紅霉素、氟苯尼考、諾氟沙星、卡那霉素、替米考星、泰拉霉素、加米霉素和四環素分別溶解到1-5mL緩沖液中，并將每種藥物依次稀釋至128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0 .125，單位為μg/mL；

S3 .用加樣器分別吸取各濃度藥物添加到相對應的96孔板中，靜置30分鐘后，吸出棄去。