[發(fā)明專利]一種檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711447790.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN109971754A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 遲大利;吳大治;夏懿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海星耀醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/04;C12R1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）的LAMP檢測(cè)靶點(diǎn)：用于對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行快速檢測(cè)的專用引物，即根據(jù)結(jié)核分枝桿菌基因組的特異性保守靶序列設(shè)計(jì)，用以定性檢測(cè)待測(cè)樣品中的結(jié)核分枝桿菌；每套引物包含4條寡核苷酸序列，即F3、B3、FIP和BIP。

2.一種結(jié)核分枝桿菌的LAMP檢測(cè)方法，主要包括以下步驟：以待測(cè)物的基因組DNA為模板，在權(quán)利要求1所述專用引物的引導(dǎo)下進(jìn)行LAMP擴(kuò)增；反應(yīng)結(jié)束后肉眼觀察產(chǎn)物是否渾濁；與陰性對(duì)照相比，明顯出現(xiàn)渾濁物的樣本為陽性，陽性產(chǎn)物經(jīng)離心后在試管底部出現(xiàn)沉淀物；若無渾濁現(xiàn)象，則為陰性標(biāo)本；亦可在反應(yīng)液中添加3μl SYBR GREEN（×100），在紫外光激發(fā)下觀察結(jié)果，產(chǎn)物呈熒光綠色表示該樣品存在結(jié)核分枝桿菌感染，顏色無變化表示待測(cè)樣品中不存在結(jié)核分枝桿菌感染；或利用濁度儀監(jiān)測(cè)反應(yīng)中的濁度變化來判斷結(jié)果，濁度上升表示待測(cè)樣品中存在結(jié)核分枝桿菌(陽性)，濁度無變化表示待測(cè)樣品為陰性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于：使用磁珠法核酸提取試劑對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行核酸提取；LAMP反應(yīng)體系包括：待測(cè)物的基因組DNA 12μl，20mM Tris·HCl (pH8.8)，10mM KCl，10mM MgSO₄，10mM(NH₄)₂SO₄，0.1% Tween20，1M Betaine，1.5mM dNTP each，9UBst DNA polymerase，引物用量為：6pmol F3和B3，48pmol FIP和BIP。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于LAMP擴(kuò)增條件為：反應(yīng)管置于54~68℃恒溫反應(yīng)30~90min，優(yōu)選為62℃恒溫反應(yīng)60min。