日韩在线一区二区三区,日本午夜一区二区三区,国产伦精品一区二区三区四区视频,欧美日韩在线观看视频一区二区三区 ,一区二区视频在线,国产精品18久久久久久首页狼,日本天堂在线观看视频,综合av一区

[發明專利]一種臍帶組織塊凍存、復蘇以及制備間充質干細胞的方法在審

專利信息
申請號: 201711447536.8 申請日: 2018-04-19
公開(公告)號: CN108251361A 公開(公告)日: 2018-07-06
發明(設計)人: 王健;王仁杰;熊華強;秦連榮 申請(專利權)人: 重慶斯德姆生物技術有限公司
主分類號: C12N5/0775 分類號: C12N5/0775;A01N1/02;C40B50/06
代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219 代理人: 劉立春
地址: 400020 重慶*** 國省代碼: 重慶;50
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 間充質干細胞 凍存 復蘇 制備 臍帶組織塊 塊狀組織 臍帶組織 液氮 冷藏 冷凍 清洗 培養皿 無血清培養基 恒溫水浴 明膠 凍存液 擴增 解凍 備用 接種 取出 剝離 消毒
【權利要求書】:

1.一種臍帶組織塊凍存、復蘇以及制備間充質干細胞的方法,其特征在于,所述方法包括以下步驟:

(1)用消毒液對臍帶組織表面進行消毒,將臍帶剪開,平鋪,用緩沖液清洗臍帶組織;

(2)將步驟(1)獲得的臍帶組織剪成組織段;

(3)剝離所述組織段的華通膠,將華通膠置于潔凈的離心管內,用手術剪剪成塊狀;

(4)向所述塊狀組織中加入無血清培養基,無血清培養基的體積為所述塊狀組織體積的二分之一,重懸塊狀組織后加入與無血清培養基等體積的預冷凍存液,分裝至凍存管中;

(5)將步驟(4)獲得的含有塊狀組織的凍存管先后在4℃下冷藏0.5小時,-20℃冷藏2小時,-80℃下冷凍1天,最后在-196℃液氮中冷凍備用;

(6)需要時將步驟(5)冷凍的塊狀組織從液氮中取出,在恒溫水浴中解凍,用移液管吸取解凍的組織塊,放入潔凈的離心管中,加入無血清培養基混勻,然后于低溫離心,去掉上清液;

(7)將步驟(6)離心后的塊狀組織接種至明膠鋪被的培養皿中,加入無血清培養基后放入CO2培養箱內培養;以及

(8)培養后的3~5天進行第一次換液,以后4~5天換一次液,待細胞融合度達到70%以上后,使用胰蛋白酶進行消化后傳代,即獲得臍帶間充質干細胞。

2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述消毒液為體積百分濃度75%的酒精;所述緩沖液為含有氨基青霉素和硫酸鏈霉素的PBS緩沖液。

3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述組織段的長度2~4cm;所述塊狀的表面積為1~2mm3

4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述預冷凍存液包含二甲基亞砜。

5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,以體積計,所述無血清培養基包括以下成分:

α-MEM10.3g/L、碳酸氫鈉2.3g/L、碳酸鈉1.8g/L、磷酸一氫鈉2.0g/L、磷酸二氫鈉1.7g/L、L-谷氨酰胺2-8mM、重組人白蛋白2-6g/L、重組人轉鐵蛋白10-15mg/L、重組人胰島素5-10mg/L、β-巰基乙醇50nM、谷胱甘肽0.1-3mg/L、對氨基苯甲酸0.5-5mg/L、維生素B 25-40mg/L、維生素C 20-50mg/L、黃體酮10-20ng/mL、腐胺5-10mg/L、肝素5-10IU/mL、EGF5-10ng/mL、b-FGF 6-10ng/mL、HGF 6-10ng/mL、VEGF 6-10ng/mL、脂質0.1-1mg/L、微量元素1-8mg/L以及式I化合物6-12μM。

6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述式I化合物的結構式如下:

7.根據權利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述脂質包括膽固醇、花生四烯酸、原兒茶酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸中的一種或多種的組合。

8.根據權利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述微量元素包括Mg、Cu、Zn、Se、Fe、Sn、Ge、Rb、Co和Mn中的任意一種或多種的組合。

9.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,進一步包括步驟:

(9)針對步驟(8)所得臍帶間充質干細胞,檢測以下項目的至少一項:細胞活性、細胞污染、遺傳病、HLA-ABC/DR配型;或

(10)將步驟(8)所得傳代后的臍帶間充質干細胞于液氮中凍存,備用。

10.一種建立臍帶干細胞數據庫的方法,其特征在于,所述方法包括權利要求1-9任一項所述方法的步驟,以及以下步驟:將傳代后的細胞于液氮中凍存并記錄相關胎兒信息,并進行細胞的生物學特性及多向分化潛能鑒定,以及對細胞進行分子遺傳學診斷,保存細胞的所有相關數據,建立臍帶干細胞的數據庫并與凍存細胞進行關聯。

下載完整專利技術內容需要扣除積分,VIP會員可以免費下載。

該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于重慶斯德姆生物技術有限公司,未經重慶斯德姆生物技術有限公司許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服

本文鏈接:http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711447536.8/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。

×

專利文獻下載

說明:

1、專利原文基于中國國家知識產權局專利說明書;

2、支持發明專利 、實用新型專利、外觀設計專利(升級中);

3、專利數據每周兩次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、內容包括專利技術的結構示意圖流程工藝圖技術構造圖

5、已全新升級為極速版,下載速度顯著提升!歡迎使用!

請您登陸后,進行下載,點擊【登陸】 【注冊】

關于我們 尋求報道 投稿須知 廣告合作 版權聲明 網站地圖 友情鏈接 企業標識 聯系我們

鉆瓜專利網在線咨詢

周一至周五 9:00-18:00

咨詢在線客服咨詢在線客服
tel code back_top
主站蜘蛛池模板: 亚洲制服丝袜中文字幕| 欧美高清性xxxxhdvideos| 国产性生交xxxxx免费| 欧美一区二区精品久久| 国产suv精品一区二区4| 亚洲欧美一区二区三区1000| 亚洲神马久久| 国产欧美日韩综合精品一| 午夜电影一区| 欧美在线视频精品| 国产丝袜一区二区三区免费视频| 狠狠色噜噜狠狠狠狠2021天天| 国产91电影在线观看| 国产清纯白嫩初高生在线播放性色 | 欧美一区二区三区激情视频| 91久久久久久亚洲精品禁果| 亚洲精品久久久久玩吗| 亚洲精品色婷婷| 国产呻吟久久久久久久92| 国产精品19乱码一区二区三区| 日韩欧美亚洲视频| 销魂美女一区二区| 午夜看大片| 精品国产乱码久久久久久软件影片| 日韩av电影手机在线观看| 免费的午夜毛片| 精品国产1区2区3区| 一区二区在线国产| 日韩欧美一区二区久久婷婷| 狠狠操很很干| 免费精品99久久国产综合精品应用| 扒丝袜网www午夜一区二区三区| 国产精品乱战久久久| 高清人人天天夜夜曰狠狠狠狠| 偷拍自中文字av在线| 国产精品对白刺激在线观看 | 韩漫无遮韩漫免费网址肉| 国产日韩欧美一区二区在线观看| 久久国产欧美一区二区三区精品| 亚洲精品国产主播一区| 亚洲理论影院| 日本一区二区三区在线看 | 91精品夜夜| 国产欧美一区二区三区在线| 国产69精品久久久久9999不卡免费 | 欧美日韩一区二区三区四区五区| 日韩av一区二区在线播放 | 久久99亚洲精品久久99| 国产精品视频久久久久久| _97夜夜澡人人爽人人| 91精品高清| 国产欧美一区二区三区不卡高清 | 国产日韩一区在线| 欧美精品在线观看一区二区| 综合久久激情| 久久久久久中文字幕| 一区二区三区欧美视频| 男女无遮挡xx00动态图120秒| 精品国产鲁一鲁一区二区三区| 狠狠色丁香久久婷婷综合丁香| 国产精品欧美久久久久一区二区| 精品国产区一区二| 国产精品久久久视频| 欧洲在线一区二区| 久久国产精彩视频| 91九色精品| 日韩亚洲精品视频| 国产区二区| 久久午夜无玛鲁丝片午夜精品| 久久免费视频一区二区| 久久中文一区二区| 日韩一级片免费视频| 亚洲国产aⅴ精品一区二区16| 免费午夜片| 亚洲一区精品视频| 国产69精品久久| 国产欧美综合一区| 99精品黄色| 日韩av在线免费电影| 国产精品对白刺激久久久| 韩日av一区二区| 国产91清纯白嫩初高中在线观看| 99精品一级欧美片免费播放| 欧美一区二区三区国产精品| 国内揄拍国产精品| 欧美日韩亚洲三区| 91免费视频国产| 亚洲国产精品美女| 久久夜靖品2区| 不卡在线一区二区| 国产午夜一区二区三区| 国产在线欧美在线| 欧美日韩国产在线一区| 午夜免费av电影| 日韩av中文字幕第一页| 国产精品一区二区三| 精品亚洲午夜久久久久91| 亚洲欧美国产精品久久| 91区国产| 欧美综合在线一区| 日韩三区三区一区区欧69国产 | 久久99精品久久久大学生| 99久久精品一区二区| 亚洲欧美一二三| 在线观看欧美日韩国产| 狠狠色丁香久久综合频道| 好吊妞国产欧美日韩免费观看网站| 99视频国产在线| 欧美日韩一区二区三区在线观看视频| 欧美hdxxxx| 99精品国产一区二区三区不卡| 日本一区二区三区免费视频| 欧美极品少妇videossex| 右手影院av| 精品国产一区二| 国产亚洲精品久久久久久久久动漫| 国产理论一区二区三区| 精品视频久| 狠狠色噜噜狠狠狠狠88| 国产麻豆精品久久| 制服丝袜亚洲一区| 欧美黑人巨大久久久精品一区| 2020国产精品自拍| 国产日韩一区二区三免费| 欧美资源一区| 国产免费区| a级片一区| 娇妻被又大又粗又长又硬好爽 | 欧美一级久久精品| 国产精品日韩高清伦字幕搜索| www.日本一区| 亚洲精欧美一区二区精品| 性生交片免费看片| 99精品偷拍视频一区二区三区| 国产一区二区精品在线| 欧美一级免费在线视频| 精品欧美一区二区精品久久小说 | 国产不卡网站| 亚洲欧美日韩综合在线| 国产精品久久91| 亚洲色欲色欲www| 午夜av在线电影| 亚洲欧美日韩三区| 国产一二区在线| 久久不卡一区| 国产乱人伦精品一区二区| 91黄色免费看| 亚洲精品久久久中文| 欧美乱妇高清无乱码免费| 久久99久国产精品黄毛片入口| free性欧美hd另类丰满| 久久二区视频| 日本中文字幕一区| 男女无遮挡xx00动态图120秒| 中文字幕一区二区三区四| 国产精品麻豆99久久久久久| 99久久婷婷国产亚洲终合精品| 狠狠色丁香久久综合频道| 日韩av一二三四区| 中文字幕+乱码+中文字幕一区 | 日本三级香港三级| 精品国产免费一区二区三区| 国产麻豆一区二区三区在线观看| 99久久夜色精品国产网站| 少妇av一区二区三区| 97人人模人人爽视频一区二区 | 国产97免费视频| 亚洲网站久久| 久久久久久久国产| 狠狠色噜噜狠狠狠狠综合久| 欧美精品一卡二卡| 狠狠色丁香久久婷婷综| 国产精品一二二区| 91精品福利观看| 亚洲精品乱码久久久久久写真| 国产在线精品一区二区在线播放| 久久精品爱爱视频| 91人人精品| 亚洲五码在线| 91精品国产综合久久婷婷香| 性欧美1819sex性高播放| 狠狠色综合久久丁香婷婷| 国产一区=区| 亚洲国产视频一区二区三区| 国产一二区视频| 97午夜视频| 亚洲精品少妇一区二区| 国产88av| 国产欧美日韩精品一区二区三区| 欧美精选一区二区三区| 亚洲国产精品激情综合图片| 国产精品网站一区| 国产精品视频二区三区| 国产999在线观看| 免费看片一区二区三区| 91视频国产一区| 欧美老肥婆性猛交视频| 李采潭伦理bd播放| 强制中出し~大桥未久4| 国产欧美综合一区| 国内久久久| 免费毛片a| 国产91热爆ts人妖系列| 国产精品中文字幕一区二区三区 | 亚洲精品日本久久一区二区三区| 国产免费第一区| 久久久久久亚洲精品| 欧美激情综合在线| 999久久久国产精品| 欧美午夜精品一区二区三区| 97精品超碰一区二区三区| 亚洲精品少妇一区二区 | 国产资源一区二区| 亚洲第一天堂无码专区 | 999久久久国产| 国产一区在线精品| 欧美一区二区免费视频| 欧洲在线一区| 久久精品视频一区二区| 中文字幕视频一区二区| 国产精品国外精品| 69xx国产| 日韩国产精品一区二区| 久久国产精品麻豆| 91麻豆精品国产91久久久久推荐资源| 91超碰caoporm国产香蕉| 亚洲欧洲国产伦综合| 日韩有码一区二区三区| 欧美日韩一区二区三区69堂| 国产乱对白刺激在线视频| 538国产精品一区二区在线| 456亚洲精品| 午夜影院一级| 国产91在线播放| 自拍偷在线精品自拍偷写真图片| 久久精品国产一区二区三区不卡| 久久久久久中文字幕| 午夜精品一二三区| 91精品国模一区二区三区| 欧美一区二区三区中文字幕| 强行挺进女警紧窄湿润| 久久久99精品国产一区二区三区| 国产欧美日韩精品在线| 色噜噜狠狠色综合中文字幕| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 粉嫩久久99精品久久久久久夜|