[發(fā)明專利]一種烏參多糖的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711447375.2
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108047347A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設計）人: 陳蔭;楊紅麗
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

1.一種烏參多糖的制備方法，其特征在于所述的制備方法包括如下步驟：

a）剝掉外皮的東海烏參，剪碎后經2倍體積丙酮反復脫脂至少2次，將脫脂完全后的烏參置于干燥箱中40-50℃烘干；

b）取干燥后的魚鰾經粉碎機粉碎過100目篩后置于燒杯中，并加入20倍體積的1M KOH溶液，堿解1.5-2.5h；

c）然后，先用冰醋酸調節(jié)pH至4-5后加入4%胃蛋白酶，35-40℃下提取1.5-2.5h后再用0.1M NaOH調節(jié)pH至7.8-8.2后加入4%胰蛋白酶，35-40℃下提取1.5-2.5h，最后用冰醋酸調回至中性，再升溫至75-85℃提取，0.5-1.5h將酶滅活；

d）將得到的水提物于7500-8500 r/min高速離心機離心15-25min后留上清液；殘渣按上述提取方法再重復提取一次；

e）合并兩次所得上清液，經45-55℃旋轉蒸發(fā)儀濃縮至原體積的1/10，加入4倍體積無水乙醇醇沉過夜,然后醇沉物再經過Sevege法反復脫除蛋白，經透析袋流水透析68-75h后，冷凍干燥即得淡黃色粉末狀烏參粗多糖。

2.根據權利要求1所述的烏參多糖的制備方法，其特征在于所述的制備方法包括如下步驟：

a）剝掉外皮的東海烏參，剪碎后經2倍體積丙酮反復脫脂3次，將脫脂完全后的烏參置于干燥箱中45℃烘干；

b）取干燥后的魚鰾30 g經粉碎機粉碎過100目篩后置于燒杯中，并加入20倍體積的1MKOH溶液，堿解2h；

c）然后，先用冰醋酸調節(jié)pH至4.5后加入4%胃蛋白酶，37℃下提取2h后再用0.1M NaOH調節(jié)pH至8后加入4%胰蛋白酶，37℃下提取2h，最后用冰醋酸調回至中性，再升溫至80℃提取1h將酶滅活；

d）將得到的水提物于8000 r/min高速離心機離心20 min后留上清液；殘渣按上述提取方法再重復提取一次；

e）合并兩次所得上清液，經50℃旋轉蒸發(fā)儀濃縮至原體積的1/10，加入4倍體積無水乙醇醇沉過夜,然后醇沉物再經過Sevege法反復脫除蛋白，經透析袋截留分子量3500 Da、流水透析72h后，冷凍干燥即得2.5g淡黃色粉末狀烏參粗多糖。

3.根據權利要求1或2所述烏參多糖的制備方法，其特征在于所述烏參粗多糖通過使用Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換色譜柱（2.6×50 cm）進行梯度洗脫，確定分段洗脫適宜的NaCl濃度分別為0和2 mol/L，兩個多糖組分分別命名為W0，W2；將所得的各多糖組分透析，濃縮，凍干，W2即為所得組分。