[發(fā)明專利]檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711444733.4
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN107894506B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋曉暉;孫雨;楊林;王傳彬;吳佳俊;董浩;汪葆玥;畢一鳴;楊天意;張晨
• 申請（專利權(quán)）人: 中國動物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

本發(fā)明公開了檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。該酶聯(lián)免疫試劑盒包括包被抗原，所述包被抗原為重組羊痘病毒融合蛋白，所述重組羊痘病毒融合蛋白為a)、b)或c)的蛋白質(zhì)：a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第8?629位氨基酸殘基的蛋白質(zhì)；b)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質(zhì)；c)將SEQ ID No.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有與a)相同活性的可溶性蛋白質(zhì)。將該重組羊痘病毒融合蛋白作為包被抗原建立的酶聯(lián)免疫試劑盒檢測羊痘病毒抗體的方法不僅可用于羊痘的診斷，而且可評價疫苗免疫效果，可快速準(zhǔn)確的檢測羊痘。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

羊痘，又叫羊“天花”，是由羊痘病毒(Capripoxvirus，CaPV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，具有高發(fā)病率和能造成嚴(yán)重畜牧業(yè)經(jīng)濟損失的特點。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須上報的傳染病，可見其重要性。因該病發(fā)病急、發(fā)病率高、發(fā)病后對羊毛、羊絨質(zhì)量和肉制品的產(chǎn)量都有很大的影響，給我國養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前檢測抗羊痘病毒抗體的標(biāo)準(zhǔn)方法是羊痘血清中和試驗，該方法是檢測羊痘病毒屬抗體的有效方法，但是也存在很多的缺點。該方法的主要缺點是羊痘病毒培養(yǎng)困難，中和試驗周期一般為7-14天，既費時費力，又需要活病毒進(jìn)行試驗，而在無羊痘流行的國家和地區(qū)是禁止活病毒入境的，所以說該方法并不適用于基層羊痘凈化，同時目前國內(nèi)外也沒有一個很好的血清學(xué)抗體檢測方法。

羊痘診斷中面臨的難題是感染羊血清中抗體水平太低，尤其是疫苗免疫羊血清中抗體水平更低，往往檢測不到。目前，為了檢測痘病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，國外學(xué)者試圖建立多種抗體檢測方法，并且不斷努力改進(jìn)這些方法，以提高其敏感性和特異性。Lamien等2011年報道利用密度梯度超速離心純化的病毒抗原，建立了間接ELISA方法，但是其敏感性取決于純化抗原的純度。蘭州獸醫(yī)研究所的馬維民博士等2006年利用羊痘病毒主要抗原蛋白P32蛋白建立的iELISA方法，其特異性較好，與羊口瘡、牛痘感染血清無交叉反應(yīng)，但是敏感性方面較差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何提高羊痘病毒抗體檢測的靈敏度，并且降低漏檢率。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒。

本發(fā)明所提供的檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒包括包被抗原，所述包被抗原為重組羊痘病毒融合蛋白，所述重組羊痘病毒融合蛋白為a)、b)或c)的蛋白質(zhì)：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第8-629位氨基酸殘基的蛋白質(zhì)；

b)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質(zhì)；

c)將SEQ ID No.2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有與a)相同活性的可溶性蛋白質(zhì)。

上述檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒中，a)的蛋白質(zhì)名稱為L1-P32-A33-Y，b)的蛋白質(zhì)名稱為His-L1-P32-A33-Y-His。SEQ ID No.2由637個氨基酸殘基組成。

上述檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒中，所述重組羊痘病毒融合蛋白可按照包括如下步驟的方法制備：使所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因在生物中進(jìn)行表達(dá)得到所述重組羊痘病毒融合蛋白；所述生物為微生物、植物或非人動物。

上述檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒中，使所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因在生物中進(jìn)行表達(dá)包括將所述的重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因?qū)胧荏w微生物，得到表達(dá)所述重組羊痘病毒融合蛋白的重組微生物，培養(yǎng)所述重組微生物，表達(dá)得到所述重組羊痘病毒融合蛋白。

上述檢測羊痘病毒抗體的酶聯(lián)免疫試劑盒中，所述受體微生物可為C1)-C4)中的任一種: