[發明專利]檢測羊痘病毒抗體的酶聯免疫試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201711444733.4
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN107894506B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 宋曉暉;孫雨;楊林;王傳彬;吳佳俊;董浩;汪葆玥;畢一鳴;楊天意;張晨
• 申請（專利權）人: 中國動物疫病預防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.檢測羊痘病毒抗體的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述酶聯免疫試劑盒包括包被抗原，所述包被抗原為重組羊痘病毒融合蛋白，所述重組羊痘病毒融合蛋白為a)、b)或c)的蛋白質：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第8-629位氨基酸殘基的蛋白質；

b)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質；

c)將SEQ ID No.2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有與a)相同活性的可溶性蛋白質。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述重組羊痘病毒融合蛋白按照包括如下步驟的方法制備：使所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因在生物中進行表達得到所述蛋白質；所述生物為微生物或植物。

3.根據權利要求2所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：使所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因在生物中進行表達包括將所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因導入受體微生物，得到表達所述重組羊痘病毒融合蛋白的重組微生物，培養所述重組微生物，表達得到所述重組羊痘病毒融合蛋白。

4.根據權利要求3所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述受體微生物為原核微生物。

5.根據權利要求4所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述原核微生物為革蘭氏陰性細菌。

6.根據權利要求5所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述革蘭氏陰性細菌為埃希氏菌屬細菌。

7.根據權利要求6所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述埃希氏菌屬細菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

8.根據權利要求2-7中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述重組羊痘病毒融合蛋白的編碼基因為如下1)-4)中任一所述的DNA分子：

1)編碼序列是SEQ ID No.1的第25-1890位核苷酸的DNA分子；

2)核苷酸序列是SEQ ID No.1的第25-1890位核苷酸的DNA分子；

3)編碼序列是SEQ ID No.1的第4-1917位核苷酸的DNA分子；

4)核苷酸序列是SEQ ID No.1的DNA分子。

9.根據權利要求3-7中任一所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述重組微生物為將pET30a-L1-P32-A33-Y導入大腸桿菌BL21(DE3)得到的表達氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質的重組微生物，所述重組微生物命名為BL21(DE3)/pET30a-L1-P32-A33-Y，所述pET30a-L1-P32-A33-Y是用核苷酸序列是SEQ ID No.1的第1-1896位的DNA替換pET30a(+)的Nde I和XhoI識別位點間的片段，保持pET30a(+)的其它序列不變，得到的重組表達載體。

10.根據權利要求9所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述表達為誘導表達，所述誘導表達是用0.75mM的IPTG在16℃誘導13-24小時。

11.根據權利要求9所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述表達為誘導表達，所述誘導表達是用0.75mM的IPTG在16℃誘導13-16小時。

12.根據權利要求9所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述表達為誘導表達，所述誘導表達是用0.75mM的IPTG在16℃誘導13小時。

13.根據權利要求9所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：所述表達為誘導表達，所述誘導表達是用0.75mM的IPTG在16℃誘導16小時。

14.權利要求1所述的檢測羊痘病毒抗體的酶聯免疫試劑盒在制備羊痘診斷試劑盒中的應用。

15.權利要求1所述的檢測羊痘病毒抗體的酶聯免疫試劑盒在制備羊痘監測試劑盒中的應用。