[發(fā)明專利]一種高效表達(dá)重組雞α干擾素的工程菌

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711444595.X
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108220214A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 焦培榮;廖明;吳斯宇;黃鑒妮;馮賽祥;何婉婷
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/21;C07K14/56
• 代理公司: 石家莊德皓專利代理事務(wù)所(普通合伙) 13129
• 代理人: 齊軍彩;楊瑞龍

本發(fā)明公開了一種高效表達(dá)重組雞α干擾素的工程菌，其獲得包括以下步驟：S1、根據(jù)大腸桿菌密碼子的偏好性對Genebank中發(fā)表的雞α干擾素基因序列進行密碼子優(yōu)化合成；S2、根據(jù)優(yōu)化后的雞α干擾素基因，設(shè)計特異性引物；S3、將雞α干擾素基因PCR擴增；PCR產(chǎn)物經(jīng)EcoRI、HindIII雙酶切克隆到原核表達(dá)載體pET?41a；S4、將測序正確的pET?41a?ChIFN?α重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞；S5、重組雞α干擾素的原核表達(dá)及抗病毒活性測定。本發(fā)明公開的工程菌可以實現(xiàn)雞α干擾素的高效表達(dá)，獲得的雞α干擾素抗病毒活性達(dá)到1.71×10⁷UI/mg。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因重組技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種高效表達(dá)重組雞α干擾素的工程菌。

背景技術(shù)

近年來我國養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展迅速，規(guī)模不斷擴大。但是，禽流感、新城疫，雞傳染性支氣管炎等病毒類疾病的流行制約了養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要因素。目前我國仍然采用疫苗免疫、化學(xué)藥物及抗生素治療等方法來防制禽類疾病。但由于病原的血清型復(fù)雜、變異速度快，常常導(dǎo)致疫苗的免疫效果不佳，同時抗生素和化學(xué)藥物的使用又因為病原的耐藥性與藥物殘留問題而限制了其使用的范圍。因此迫切需要廣譜抗病毒生物制劑來治療和加強免疫效果。

干擾素(Interferon，IFN)是一類重要的細(xì)胞因子，由生物體細(xì)胞受到病毒或其他誘生劑的作用而產(chǎn)生的分泌性蛋白，具有抗病毒、抗細(xì)胞增殖、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。

在臨床應(yīng)用上，干擾素有著抗生素?zé)o法替代的作用，研究表明禽干擾素具有抗病毒較強、抗病毒譜廣等優(yōu)點，細(xì)胞接觸干擾素在短時間內(nèi)就能產(chǎn)生抗病毒作用，可適用于不同品種的雞，對生產(chǎn)性能影響小。但目前市面上禽類重組干擾素的制品較少，制作成本相對較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種高效表達(dá)重組雞α干擾素的工程菌。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明一種高效表達(dá)重組雞α干擾素的工程菌，其獲得包括以下步驟：

S1、根據(jù)大腸桿菌密碼子的偏好性對Genebank中發(fā)表的雞α干擾素基因序列進行密碼子優(yōu)化，人工合成優(yōu)化后雞α干擾素基因；

S2、根據(jù)密碼子優(yōu)化后的雞α干擾素基因，設(shè)計一對特異性的引物：

ChIFN-α-F：GCGAATCATATGTGCAACCATCTGCGCCCGCA

ChIFN-α-R：GCGAATGGATCCCTAGGTGCGGGTGTTGCCGG

S3、以人工合成的雞α干擾素基因為模板，以含EcoRI酶切位點的ChIFN-α-F和含HindIII酶切位點的ChIFN-α-R為引物，將雞α干擾素基因PCR擴增；PCR產(chǎn)物經(jīng)EcoRI、HindIII雙酶切克隆到原核表達(dá)載體pET-41a，得到經(jīng)PCR鑒定正確的重組陽性質(zhì)粒；

S4、將測序正確的pET-41a-ChIFN-α重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)卡那霉素抗性平板篩選、EcoRI、HindIII 雙酶切鑒定，進一步驗證該重組陽性質(zhì)粒；

S5、重組雞α干擾素的原核表達(dá)及抗病毒活性測定。

一種雞α干擾素基因，其序列如SEQ ID NO：1所示。

一種雞α干擾素的氨基酸，其序列如SEQ ID NO：2所示。

本發(fā)明所達(dá)到的有益效果是：