[發明專利]一種免疫球蛋白IgG檢測試劑盒及其制備、使用方法

在審

• 申請號: 201711440998.7
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108120839A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 甘宜梧;胡曉飛;邵丹;羅維曉;李靜;王慧娟
• 申請（專利權）人: 山東博科生物產業有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種穩定的免疫球蛋白IgG檢測試劑盒,其用于對血清或血漿中的免疫球蛋白IgG含量的檢測；免疫比濁法IgG檢測試劑盒在試劑穩定性能上存在很大缺陷，本發明提供一種穩定的IgG檢測試劑盒通過更換緩沖體系，使抗體在此環境中更加穩定，從而增強試劑的穩定性。

技術領域

本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種免疫球蛋白IgG檢測試劑盒及其制備、使用方法,其用于對血清或血漿中的免疫球蛋白IgG含量的檢測。

背景技術

人體血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占總的免疫球蛋白的70-75%，人體血清免疫球蛋白IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，它僅以單體形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG，它在抗感染中起到主力軍作用，它能夠促進單核巨噬細胞的吞噬作用（調理作用），中和細菌毒素的毒性（中和毒素）和病毒抗原結合使病毒失去感染宿主細胞的能力（中和病毒）。它是唯一能通過胎盤的Ig，在自然被動免疫中起重要作用。此外，IgG 還具有調理吞噬和結合SPA等作用。

現有技術中通用的免疫球蛋白IgG檢測診斷方法是免疫比濁法。該方法使用的緩沖體系是Tris-HCl。Tris-HCl緩沖液的優點是：①因為Tris堿的堿性較強，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液；②對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀。

Tris-HCl緩沖液的缺點是：溫度效應大，溫度變化對緩沖液pH值的影響很大，即：△pKa／℃＝－0.031 ，例如：4℃時緩沖液的pH＝8.4，則37℃時的pH＝7.4，所以一定要在使用溫度下進行配制，并在配置和使用溫度下保存。這點體現在免疫球蛋白IgG檢測試劑盒中就是，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液試劑盒在0℃～4℃下保存3個月以內可用，檢測結果穩定性很好，但放置3個月后會發現試劑渾濁有沉淀，檢測結果穩定性不好，不能再使用，需要重新配置，造成資源浪費。同時R2試劑盒中的抗體也易在溫度降低時或長時間放置后出現沉淀。

因此，提供一種能夠對溫度變化不敏感的穩定的免疫球蛋白IgG檢測試劑盒，是現有技術中亟需解決的問題。

PBS是磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline)，一般作為溶劑，起溶解保護試劑的作用。它是生物化學研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na₂HPO4、KH₂PO4、NaCl和KCl，由于Na₂HPO4和KH₂PO4它們有二級解離，緩沖的pH值范圍很廣，而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補加1 mmol/L CaCl₂和0.5 mmol/LMgCl₂，以提供雙價陽離子。PBS緩沖液(pH7.2-7.4)的組分為:NaCl 137mmol/L，KCl2.7mmol/L，Na₂HPO4 10mmol/L， KH₂PO4 2mmol/L。

含0.05%吐溫-20的pH7.4的磷酸鹽緩沖液(簡稱為PBS-T)配制方法為:稱取磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、吐溫-20，加水。PBS 1L的配方為:磷酸二氫鉀0.27g，磷酸氫二鈉1.42g，氯化鈉8g，氯化鉀0.2g，加去離子水約800mL充分攪拌溶解，然后加入濃鹽酸調pH至7.4，最后定容到1L。

不僅偽狂犬病毒要用PBS稀釋，一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。原因就是它具有鹽平衡、可調整的適宜pH緩沖作用，蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結構及生物特性；生理鹽水不具有調整pH的作用，對完整的、具有活性的物質不能保證其在最適條件下參與生物反應，所以使用PBS是首選。