[發明專利]一種降血糖提取物的檢測方法

在審

• 申請號: 201711438767.2
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN108037235A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 濟南昊雨青田醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/88;A61K36/75;A61P3/10
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1.一種降血糖提取物的檢測方法，其特征在于所述的降血糖提取物的制備方法為:

（1）取毛麻楝葉1重量份、小黃皮葉1重量份、香椿葉1重量份，混勻，粉碎，過20目篩，用環己烷為溶劑，60℃提取3次，每次提取時間為2.5小時，每次溶劑用量為毛麻楝葉、小黃皮葉及香椿葉總重量的12倍，濾過，合并環己烷提取液，減壓回收環己烷，濃縮干燥得粗提物A，環己烷提取后的藥渣備用；

（2）將步驟（1）環己烷提取后的藥渣，用體積比1:5的甲酸乙酯-甲醇混合溶劑提取，75℃提取4次，每次提取時間為3.5小時，每次溶劑用量為毛麻楝葉、小黃皮葉及香椿葉總重量的15倍，濾過，合并甲酸乙酯-甲醇提取液，減壓回收溶劑，濃縮干燥得粗提物B，甲酸乙酯-甲醇提取后的藥渣備用；

（3）將步驟（2）甲酸乙酯-甲醇提取后的藥渣，用體積比4:6的水-乙醇混合溶劑提取，50℃提取7次，每次提取時間為3小時，每次溶劑用量為毛麻楝葉、小黃皮葉及香椿葉總重量的15倍，濾過，合并水-乙醇提取液，減壓回收溶劑，濃縮干燥得粗提物C，水-乙醇提取后的藥渣備用；

（4）將步驟（3）水-乙醇提取后的藥渣，用水提取，80℃提取2次，每次提取時間為1小時，每次溶劑用量為毛麻楝葉、小黃皮葉及香椿葉總重量的8倍，濾過，合并水提取液，減壓濃縮至浸膏，干燥得粗提物D；

（5）將步驟（2）得到的粗提物B，經過重量份數比2:1混合均勻的MCI 凝膠-聚酰胺混合色譜柱，先用體積比3:97的甲醇-水洗脫，洗脫量為5個色譜柱體積，再用體積比20:80的甲醇-水洗脫，洗脫量為12個色譜柱體積，收集體積比20:80的甲醇-水洗脫液合并，回收溶劑，干燥得提取物E；

（6）將步驟（3）得到的粗提物C，經過重量份數比1:2混合均勻的S8大孔吸附樹脂-NKA9大孔吸附樹脂混合樹脂柱，先用體積比9:91的乙醇-水洗脫，洗脫量為4個樹脂柱體積，再用體積比50:50的乙醇-水洗脫，洗脫量為2個樹脂柱體積，收集體積比50:50的乙醇-水洗脫液合并，回收溶劑，干燥得提取物F；

（7）按重量比2:3將步驟（5）得到的提取物E與步驟（6）得到的提取物F混勻，即得降血糖提取物；

按如下方法檢測：

取降血糖提取物50mg，加體積比3:4的醋酸乙酯-二氯甲烷混合溶液50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛麻楝葉、小黃皮葉、香椿葉對照藥材各1g，混勻，粉碎過80目篩，同法制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比7:3:1.5:1:5的正己烷－丙酮－醋酸甲酯－甲醇-水的上層溶劑為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸試液，105℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯4個相同顏色的斑點；

取降血糖提取物50mg，加體積比6:5的醋酸乙酯-甲醇混合溶液50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛麻楝葉、小黃皮葉、香椿葉對照藥材各1g，混勻，粉碎過80目篩，同法制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5:3:0.4:0.2的醋酸乙酯-二氯甲烷－丙酮-甲醇為展開劑，展開，展距18cm，取出，晾干，噴以體積比1:2:95的二甲氨基卞亞基羅丹寧：硫酸：乙醇試液， 128℃烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯4個相同顏色的斑點；

取降血糖提取物50mg，加體積比7:5的二氯甲烷混-甲醇混合溶液50ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；另取毛麻楝葉、小黃皮葉、香椿葉對照藥材各1g，混勻，粉碎過80目篩，同法制成對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，測定，HPLC檢測條件：紫外檢測器，色譜柱為C18柱,流動相為體積比16:38:32的乙腈：甲醇：0.03mol/L磷酸鹽緩沖液，流速1.5ml/min,柱溫20℃，檢測波長為212nm；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，出現4個相同保留時間的色譜峰。