[發(fā)明專利]一種吲哚咔唑類生物堿及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN108084205B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設計）人: 馬忠俊;王金慧;丁婉婧
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: C07D498/22
• 分類號: C07D498/22;C12R1/465
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 朱朦琪

本發(fā)明公開了一種吲哚咔唑類生物堿及其制備方法和應用，所述吲哚咔唑類生物堿的結(jié)構(gòu)式如下式(I)所示。所述吲哚咔唑類生物堿由放線菌大米固體培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)生，經(jīng)乙酸乙酯萃取后所得的發(fā)酵物，采用凝膠柱色譜、中壓制備色譜、硅膠柱色譜和高效液相色譜分離純化得到。所述吲哚咔唑類生物堿可制備用于治療與蛋白激酶、酪氨酸激酶等抑制有關(guān)的急、慢性白血病、淋巴癌、乳腺癌、肺癌等癌癥，艾滋病，冠心病、糖尿病、老年癡呆癥等疾病的藥物。本發(fā)明吲哚咔唑類生物堿的制備方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及放線菌次級代謝產(chǎn)物制備活性化合物領(lǐng)域，具體涉及一種吲哚咔唑類生物堿及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

吲哚咔唑類化合物是一類由L-色氨酸衍生而來的雙吲哚生物堿類天然產(chǎn)物，因其具有獨特的結(jié)構(gòu)特征及其潛在的臨床應用引起了廣泛的關(guān)注。吲哚咔唑類生物堿(如staurosporine、rebeccamycin、K252a等)具有廣泛的生物活性，如抗腫瘤、抗高血壓、抗細菌、抗真菌、抗瘧疾、抗結(jié)核、保護神經(jīng)、抗血小板凝集等。其作用機制主要包括抑制蛋白激酶、酪氨酸激酶、DNA拓撲異構(gòu)酶、免疫抑制以及DNA嵌入等。

許多吲哚咔唑類生物堿表現(xiàn)出了良好的生物活性并且進入了臨床研究，如midostaurin(PKC412)在臨床Ⅱ期Ⅲ期試驗中對急性髓細胞白血病表現(xiàn)出了良好的治療效果，現(xiàn)已經(jīng)美國FDA批準上市；lestauritinib(CEP-701)目前已經(jīng)進入了臨床Ⅱ/Ⅲ期的評估，用于治療FLT3-ITD陽性急性髓細胞白血病；CT327(一種Trk A激酶抑制劑，K252a的聚乙二醇衍生物)目前正在進行Ⅱ期臨床研究，主要用于治療銀屑病。

吲哚咔唑類化合物通常結(jié)構(gòu)相似，主要分為兩類：一類是由吲哚咔唑母核衍生而來的不含糖環(huán)的結(jié)構(gòu)；另一類是由吲哚咔唑母核和連接在吲哚環(huán)上的糖環(huán)構(gòu)成。然而這些化合物選擇性較差，對癌細胞及正常體細胞均有抑制作用。

因此，尋找更多的結(jié)構(gòu)新穎、選擇性較高的吲哚咔唑衍生物成為一種必然的趨勢。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種新型的吲哚咔唑類生物堿及其制備方法和應用，該化合物為由放線菌通過大米發(fā)酵及提純后得到的天然產(chǎn)物，具有明顯的抗腫瘤及激酶抑制活性，可用于開發(fā)抗腫瘤藥物及與激酶有關(guān)的治療相關(guān)疾病的藥物。

一種吲哚咔唑類生物堿，結(jié)構(gòu)式如下式(I)所示：

所述吲哚咔唑類生物堿的制備方法如下：

1)將放線菌接種于高氏一號培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)，獲得種子液；

所述放線菌，采用中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心出售的鏈霉菌Streptomycessp.CICC 11031；

2)將所述種子液接種于大米培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)，萃取獲得發(fā)酵產(chǎn)物粗提物；

3)將所述發(fā)酵產(chǎn)物粗提物進行分離純化，獲得如式(I)結(jié)構(gòu)的吲哚咔唑類生物堿。

本發(fā)明從放線菌次級代謝產(chǎn)物中分離得到一種結(jié)構(gòu)新型的吲哚咔唑類生物堿，由星孢菌素母核及類似打開的糖環(huán)連接而成，該結(jié)構(gòu)為天然產(chǎn)物中首次發(fā)現(xiàn)。該化合物的成功提取為該類化合物的開發(fā)提供了新的資源。同時，放線菌在實驗室環(huán)境下易于培養(yǎng)，可通過大規(guī)模發(fā)酵的方式富集該化合物。

作為優(yōu)選，步驟1)中：

所述搖床培養(yǎng)的條件為：26～30℃下，150～250rpm搖床中培養(yǎng)4～6天；進一步優(yōu)選在28℃下，180rpm的搖床中培養(yǎng)。

作為優(yōu)選，步驟2)中：