[發明專利]一種消化RPE細胞的方法在審
| 申請號： | 201711430944.2 | 申請日： | 2017-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN109957545A | 公開（公告）日： | 2019-07-02 |
| 發明（設計）人： | 范國平;閆占海;方攀峰;李寧;謝磊 | 申請（專利權）人： | 江蘇艾爾康生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/079 | 分類號： | C12N5/079;C12N9/50;C12N9/00 |
| 代理公司： | 北京安杰律師事務所 11627 | 代理人： | 袁沁菲 |
| 地址： | 214028 江蘇省無錫市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 均勻覆蓋 消化 細胞貼壁 | ||
1.一種消化酶組合物，包括重組酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II，其中，使用所述酶組合物可以解除RPE細胞的貼壁狀態。
2.一種消化酶組合物在制備用于解除RPE細胞貼壁狀態的試劑或試劑盒中的應用，其中，所述消化酶組合物包括重組酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II。
3.一種消化酶組合物在解除RPE細胞貼壁狀態的用途，其中，所述消化酶組合物包括重組酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II。
4.如權利要求1至3中任一項所述的應用或如權利要求3所述的用途，其中，所述中性蛋白酶Dispase II的濃度選自0.5mg/mL至4.0mg/mL中的任一濃度，優選選自2.0mg/mL至4.0mg/mL中的任一濃度。
5.一種消化RPE細胞以解除其細胞貼壁狀態的方法，包括以下步驟：
(1)使用1×重組酶TrypLE，使其均勻覆蓋于RPE細胞；和
(2)使用中性蛋白酶Dispase II溶液，使其均勻覆蓋于RPE細胞；
其中步驟(1)和(2)是分步實施。
6.如權利要求5所述的方法，其中，所述中性蛋白酶Dispase II的濃度選自0.5mg/mL至4.0mg/mL中的任一濃度，優選選自2.0mg/mL至4.0mg/mL中的任一濃度。
7.如權利要求5或6所述的方法，其中，所述RPE細胞為培養15天至17天中任一時間點的細胞。
8.如權利要求5或6所述的方法，其中，在所述步驟(1)中重組酶TrypLE處理RPE細胞的條件為37℃溫育14至16分鐘。
9.如權利要求5或6所述的方法，其中，在所述步驟(2)中，所述中性蛋白酶Dispase II處理RPE細胞的條件為37℃溫育10至15分鐘。
10.如權利要求5或6所述的方法，其中，所述RPE細胞為培養大于17天的任一時間點的細胞。
11.如權利要求11所述的方法，其中，在所述步驟(2)中，所述中性蛋白酶Dispase II處理RPE細胞的條件為37℃溫育20至22分鐘。
12.如權利要求6至11任一項所述的方法，其步驟還包括：
在所述步驟(1)或(2)之前用無鈣鎂離子的DPBS清洗細胞并棄掉清洗液。
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