[發明專利]一種真皮成纖維細胞規模化生產系統

在審

• 申請號: 201711430115.4
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN107881144A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 方攀峰;陳爽;閆占海
• 申請（專利權）人: 江蘇艾爾康生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京安杰律師事務所11627
• 代理人: 袁沁菲

1.一種真皮成纖維細胞的生產方法，包括以下步驟：

(1)采集皮膚活組織，其中包括手術區消毒過程和組織消毒過程，在所述手術區消毒過程中使用的消毒方式包括酒精或碘伏擦拭采集的皮膚活組織，在所述組織消毒過程中使用的消毒方式至少包括清洗液淋洗真皮部位。

2.如權利要求1所述的方法，還包括以下步驟：

(2)原代細胞分離和培養；

(3)細胞表型篩選，其中選擇I型成纖維細胞進行下一步操作；

(4)擴大培養和收集細胞。

3.如權利要求1或2所述的生產方法，其中，在步驟(1)中，所述手術區消毒過程中使用的消毒方式包括酒精擦拭和碘伏擦拭。

4.如權利要求1或2所述的生產方法，其中，在步驟(1)中，所述組織消毒過程中使用的消毒方式還包括酒精擦拭表皮層和清洗液淋洗真皮部位。

5.如權利要求1或2所述的生產方法，其中，在步驟(3)中，細胞表型篩選后，進行表型檢測、流式檢測和蛋氨酸檢測,其中所述表型檢測優選通過吉薩姆染色后顯微鏡觀察形態確定，所述流式檢測優選通過成纖維細胞陽性標志物陽性率大于95％和陰性標志物陰性率小于5％確定。

6.如權利要求5所述的生產方法，其中，所述成纖維細胞陽性標志物選自CD73、CD90、和CD105所組成的組，所述成纖維細胞陰性標志物基因選自CD31和CD34所組成的組。

7.如權利要求1至6任一項所述的生產方法中，在步驟(2)中，所述原代細胞培養的方法為膠原包埋組織培養法：在培養容器中預鋪一定厚度一定濃度的膠原蛋白，將組織塊完全埋入膠原中，再膠原上層加入培養基，靜置培養。

8.如權利要求1至6任一項所述的生產方法中，在步驟(2)中，所述的原代細胞培養中使用的培養基配方為DMEM高糖培養基、15％FBS、1％NEAA、1％L-谷氨酰胺、和1％丙酮酸鈉。

9.如權利要求1至6任一項所述方法，其中，在步驟(2)中，其中，經過原代組織采集獲得的細胞，通過病毒檢測和微生物檢測后，確定該細胞是否可用于后續的細胞原代培養還是廢棄。

10.如權利要求1至6任一項所述方法，其中，在步驟(4)中，其中，經過擴大培養后的細胞，通過微生物檢測，合格的被收集，不合格的廢棄。