[發(fā)明專利]一種真皮成纖維細胞規(guī)模化生產(chǎn)系統(tǒng)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711430115.4
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN107881144A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方攀峰;陳爽;閆占海
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇艾爾康生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京安杰律師事務(wù)所11627
• 代理人: 袁沁菲

1.一種真皮成纖維細胞的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：

(1)采集皮膚活組織，其中包括手術(shù)區(qū)消毒過程和組織消毒過程，在所述手術(shù)區(qū)消毒過程中使用的消毒方式包括酒精或碘伏擦拭采集的皮膚活組織，在所述組織消毒過程中使用的消毒方式至少包括清洗液淋洗真皮部位。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，還包括以下步驟：

(2)原代細胞分離和培養(yǎng)；

(3)細胞表型篩選，其中選擇I型成纖維細胞進行下一步操作；

(4)擴大培養(yǎng)和收集細胞。

3.如權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，在步驟(1)中，所述手術(shù)區(qū)消毒過程中使用的消毒方式包括酒精擦拭和碘伏擦拭。

4.如權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，在步驟(1)中，所述組織消毒過程中使用的消毒方式還包括酒精擦拭表皮層和清洗液淋洗真皮部位。

5.如權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，在步驟(3)中，細胞表型篩選后，進行表型檢測、流式檢測和蛋氨酸檢測,其中所述表型檢測優(yōu)選通過吉薩姆染色后顯微鏡觀察形態(tài)確定，所述流式檢測優(yōu)選通過成纖維細胞陽性標志物陽性率大于95％和陰性標志物陰性率小于5％確定。

6.如權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)方法，其中，所述成纖維細胞陽性標志物選自CD73、CD90、和CD105所組成的組，所述成纖維細胞陰性標志物基因選自CD31和CD34所組成的組。

7.如權(quán)利要求1至6任一項所述的生產(chǎn)方法中，在步驟(2)中，所述原代細胞培養(yǎng)的方法為膠原包埋組織培養(yǎng)法：在培養(yǎng)容器中預(yù)鋪一定厚度一定濃度的膠原蛋白，將組織塊完全埋入膠原中，再膠原上層加入培養(yǎng)基，靜置培養(yǎng)。

8.如權(quán)利要求1至6任一項所述的生產(chǎn)方法中，在步驟(2)中，所述的原代細胞培養(yǎng)中使用的培養(yǎng)基配方為DMEM高糖培養(yǎng)基、15％FBS、1％NEAA、1％L-谷氨酰胺、和1％丙酮酸鈉。

9.如權(quán)利要求1至6任一項所述方法，其中，在步驟(2)中，其中，經(jīng)過原代組織采集獲得的細胞，通過病毒檢測和微生物檢測后，確定該細胞是否可用于后續(xù)的細胞原代培養(yǎng)還是廢棄。

10.如權(quán)利要求1至6任一項所述方法，其中，在步驟(4)中，其中，經(jīng)過擴大培養(yǎng)后的細胞，通過微生物檢測，合格的被收集，不合格的廢棄。