[發明專利]一種檢測蕪菁花葉病毒所用PCR引物及其檢測方法

在審

• 申請號: 201711426414.0
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN108060267A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 楊彩霞;付晶晶;韓彤;廖一鳴;李梁;侯秋實;于美春;王筠竹
• 申請（專利權）人: 沈陽大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 沈陽技聯專利代理有限公司 21205
• 代理人: 趙越

一種植物病毒引物及其檢測方法，涉及一種檢測蕪菁花葉病毒所用PCR引物及其檢測方法，一種檢測蕪菁花葉病毒所用到的PCR引物具體為：上游引物TuMV?CP?F（SEQ IN NO.1）：5’?tgtgtwtaycaccaggca?3’；下游引物TuMV?CP?R（SEQ IN NO.2）：5’?cataagcgagaatactaacgag?3’；本發明所提供的PCR引物對TuMV的檢出具有特異性性，可檢測出蘿卜樣品中的TuMV，并得到特異性條帶。利用RT?PCR法進行檢測，具有靈敏性高、操作簡便等特點。實驗表明，利用本發明檢測蘿卜上的蕪菁花葉病毒（TuMV）侵染，有較高的特異性。

技術領域

本發明涉及一種植物病毒引物及其檢驗方法，特別是涉及一種檢測蕪菁花葉病毒所用PCR引物及其檢測方法。

背景技術

蕪菁花葉病毒（Turnip mosaic virus, TuMV），隸屬于馬鈴薯Y病毒科（Potyviridae）馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus），該病毒為彎曲線狀粒子，長700-750nm，基因組為(+)ssRNA結構。該病毒只包含一個可開放閱讀框，編碼合成一個350 kDa多聚蛋白再利用已有的酶依次剪接成10個多肽，3’-UTR區域富含AUAU區及TATAbox，以維持結構的穩定并防止講解，5’-UTR區包含一段特異性保守序列。TuMV主要通過蚜蟲以非持久式進行傳播，目前已報到的有超過89種蚜蟲可傳毒。TuMV在進入寄主植物之后，立即進行蛋白外殼的裂解及核酸的轉錄翻譯，其3’-端的AUAU區及TATAbox可防止RNA講解。TuMV包括兩個主要株系：分別是BR寄主型和B寄主型，兩種類型的株系均可侵染蕓薹屬植物，BR型對蘿卜屬植株也有侵染性，但B型對蘿卜屬植株沒有侵染性。同其他potyvirus病毒一樣，該病毒主要通過cp基因的核苷酸同源性及氨基酸同源性進行分類，利用核酸序分析對病毒株系進行劃分。1921年美國Gardner等首次報道了TuMV白菜分離物，我國于1941年在四川的油菜花葉病樣品中首次提取出TuMV。目前，TuMV在我國廣州、山東、煙臺、棗莊、四川、杭州、上海、北京、長春及長江中下游地區均有報道，已報道的寄主有油菜、芥菜、白菜、甘藍、花菜、蘿卜、豌豆、蠶豆、番紅花、菠菜、青花菜等。

蘿卜是我國一種重要的蔬菜作物，原產于我國，在我國各個地區都有栽培，具有食用及藥用價值。蘿卜為十字花科蘿卜屬植物，一年或兩年生草本，該種植物中含有豐富的蛋白質、脂肪以及B族維生素，據相關數據顯示，蘿卜中的Vc含量高于蘋果。蘿卜屬寒性，味辛辣，具有化痰、通氣、排尿等疾病的食療，還可用于結石等疾病的預防。蘿卜品種極多，均可食用，是我國的蔬菜作物之一，近年，真菌類疾病及植物病毒病的泛濫，以蘿卜為寄主多種植物病毒復合侵染，是各地蘿卜減產的重要原因。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測蕪菁花葉病毒所用PCR引物及其檢測方法，該方法為一種檢測蕪菁花葉病毒的專用引物及其植物病理學科植物病毒病害分子檢測方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種檢測蕪菁花葉病毒所用到的PCR引物具體為：

上游引物TuMV-CP-F（SEQ IN NO.1）：5’- tgtgtwtaycaccaggca -3’；

下游引物TuMV-CP-R（SEQ IN NO.2）：5’-cataagcgagaatactaacgag-3’；

所述檢測蕪菁花葉病毒所用引物在判定蕪菁花葉病毒中的應用，可用于檢測確定蘿卜樣品是否受到辣蕪菁花葉病毒（TuMV）的侵染；包括如下步驟：