[發(fā)明專利]一種固定化纖維素酶的制備及其酶水解纖維素的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711416657.6 | 申請日： | 2017-12-25 |
| 公開（公告）號： | CN108004229A | 公開（公告）日： | 2018-05-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉研萍;馬一方;蘭淼;李秀金;袁海榮 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京化工大學(xué) |
| 主分類號： | C12N11/10 | 分類號： | C12N11/10;C12N11/08;C12N11/04 |
| 代理公司： | 北京思海天達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203 | 代理人： | 劉萍 |
| 地址： | 100029 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 固定 化纖 維素酶 制備 及其 水解 纖維素 方法 | ||
1.一種固定化纖維素酶的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：準(zhǔn)確稱取纖維素酶粉末溶于純水中，使其濃度為2.5-12.5mg/ml，待用；
準(zhǔn)確稱取戊二醛配置成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％戊二醛溶液，待用；
準(zhǔn)確稱取海藻酸鈉和聚乙二醇加入pH為4.8的酸性緩沖溶液中，室溫下混合均勻后，形成海藻酸鈉-聚乙二醇溶液，待用；其中海藻酸鈉與聚乙二醇的質(zhì)量比為1:0.5～1:2.5，海藻酸鈉溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0-6.0％，聚乙二醇分子量為1000-6000；
準(zhǔn)確量取上述海藻酸鈉-聚乙二醇溶液，依次加入上述纖維素酶溶液和戊二醛溶液，混合均勻后，于150r/min振蕩30min，之后于4℃靜置反應(yīng)4h；反應(yīng)后混合液中海藻酸鈉-聚乙二醇溶液：纖維素酶溶液：戊二醛溶液的體積比為5:1:(0.5～2.5)；將上述混合液逐滴加入至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5-4％的CaCl
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維素酶的固定化方法，其特征在于，所述的纖維素酶的酶液濃度為5mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維素酶固定化的方法，其特征在于，所述的海藻酸鈉-聚乙二醇溶于pH＝4.8緩沖溶液，配置成海藻酸鈉-聚乙二醇溶液；其中海藻酸鈉溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.5％，聚乙二醇分子量為4000；海藻酸鈉與聚乙二醇的質(zhì)量比＝1:1.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維素酶固定化的方法，其特征在于，-CaCl
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維素酶固定化的方法，其特征在于，所述的海藻酸鈉-聚乙二醇、纖維素酶、戊二醛混合溶液逐滴加入至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的CaCl
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維素酶固定化的方法，其特征在于，海藻酸鈉-聚乙二醇溶液：纖維素酶溶液：戊二醛溶液：CaCl
7.固定化酶水解纖維素的方法：具體步驟如下：上述固定化方法制備的固定化纖維素酶用于水解纖維素，將纖維素加入緩沖溶液中，使得纖維素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.0-17.0％，緩沖溶液pH為3.0-6.0；固定化纖維素酶加入上述的纖維素溶液中，投加量為每克纖維素0.5-4.0g；水解溫度為40-60℃，在120-180r/min條件下水解12-72h。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的固定化酶酶水解纖維素的方法，其特征在于，其中海藻酸鈉-聚乙二醇固定化酶水解纖維素的固定化酶投加量為每克纖維素3.55g，纖維素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.16％，pH＝5.11，水解溫度60℃，在150r/min條件下水解48h。
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