[發明專利]一種脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法

在審

• 申請號: 201711414135.2
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN107926860A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 劉玉蘭;康萍;汪龍梅;朱惠玲;王秀英
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所44287
• 代理人: 胡海國

1.一種脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，包括如下步驟：

對試驗仔豬進行脂多糖誘導處理，得到待測仔豬；

從待測仔豬的前腔靜脈采血并分離血清，測定血清中的生化指標，判斷脂多糖誘導對仔豬肝臟功能的影響；

取待測仔豬的肝臟樣品，觀察肝臟組織的形態結構和肝細胞的超微結構，并測定肝臟細胞程序性壞死關鍵基因及其蛋白表達，分析脂多糖誘導對仔豬肝臟細胞程序性壞死的作用。

2.如權利要求1所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，對試驗仔豬進行脂多糖誘導處理，得到待測仔豬的步驟中：所述脂多糖為大腸桿菌血清型脂多糖，純度大于99％，誘導處理的方式為腹膜注射。

3.如權利要求2所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，所述大腸桿菌血清型脂多糖的注射量為仔豬每公斤體重注射80～150μg，誘導時長為2～24h。

4.如權利要求1所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，對試驗仔豬進行脂多糖誘導處理，得到待測仔豬的步驟之前，還包括：

將試驗仔豬飼養在飼養籠中，試驗仔豬于22～25℃溫度條件下自由采食飲水10天；

其中，在對仔豬進行誘導處理前10～13h停止供料。

5.如權利要求4所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，所述試驗仔豬為34～36日齡的斷奶仔豬，體重為8.7～9.1kg。

6.如權利要求1所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，從待測仔豬的前腔靜脈采血并分離血清，測定血清中的生化指標，判斷脂多糖誘導對仔豬肝臟功能的影響的步驟，具體包括：

用促凝真空管從待測仔豬的前腔靜脈采血，然后通過離心分離得到血清，利用生化分析儀測定血清中的生化指標，判斷脂多糖誘導對仔豬肝臟功能的影響；

其中，生化指標包括血清中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶以及谷氨酰轉肽酶的活性。

7.如權利要求1所述的脂多糖誘導仔豬肝臟細胞程序性壞死模型的建立方法，其特征在于，取待測仔豬的肝臟樣品，觀察肝臟組織的形態結構和肝細胞的超微結構，并測定肝臟細胞程序性壞死關鍵基因及其蛋白表達，分析脂多糖誘導對仔豬肝臟細胞程序性壞死的作用的步驟，具體包括：

對采血后的待測仔豬進行戊巴比妥鈉肌肉注射，使待測仔豬完全麻醉后屠宰并取出肝臟；

將肝臟放置于冰上，并用生理鹽水沖掉肝臟上的血跡，然后切取肝臟樣品，用于肝臟組織的形態結構和肝細胞的超微結構觀察，取部分剩余肝臟剪碎后，用于肝臟細胞程序性壞死關鍵基因及其蛋白表達的測定，根據觀測結果分析脂多糖誘導對仔豬肝臟細胞程序性壞死的作用；

其中，所述肝臟細胞程序性壞死關鍵基因包括受體相互作用蛋白1、受體相互作用蛋白3、混合系列蛋白激酶結構域樣蛋白以及磷酸甘油酸變位酶5。