[發明專利]一種高產莫納克林K的紅曲菌株培育方法

在審

• 申請號: 201711413423.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108165497A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 呂玲
• 申請（專利權）人: 呂玲
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N15/01;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高產莫納克林K的紅曲菌株培育方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)紅曲霉菌種的制備，包括以下具體步驟：A、分離純化，先將紅曲米與蒸餾水按比例3∶1混合，并經過研磨機制得米漿，然后通過過濾器過濾得到菌懸液，備用；B、取具體步驟A中制得的菌懸液滴到由大豆汁制得的紅曲增殖培養基中，于30℃的恒溫箱內培養5-7天，再按10％的接種量進行第二次增殖培養5-7天，選取純化后的紅曲霉菌株，若不純即可再次按10％的接種量進行第三次增殖培養5-7天，依次類推，直至分離得到純化的紅曲霉菌株，備用。

2)紅曲霉菌落的斜面培養，其具體步驟為：A、培養基的制備，取瓊脂13g、土豆汁450mL、麥芽汁450mL、乳酸7mL、無水乙醇100mL、硝酸鈉200mL和磷酸二氫鉀200mL添加到培養皿中，并與蒸餾水按2∶1混合，通過攪拌棒攪拌均勻，同時在攪拌的過程中，添加氯化鈣用于將培養基的PH值調整至4.0，然后將制得的培養基置于殺菌鍋內，在121℃的高溫以及0.1MPa下滅菌20-25min，然后密封取出，置于30℃的恒溫箱內發酵培養8-10天，制得用于接種的培養基，備用；B、紅曲霉菌落接種，取步驟1)制得紅曲霉菌落中的菌絲接入具體步驟A制得的培養基內，使得紅曲霉菌絲在培養基內生長出紅曲霉孢子，備用；

3)紅曲霉誘變出發菌株及篩選，其具體步驟為：A、取20mL0.8％氯化鈉無菌水從步驟2)中的培養基表面進行沖洗，使得紅曲霉孢子脫離培養基，制得紅曲霉孢子菌懸液，備用；B、原子能輻射誘變，將具體步驟A制得的紅曲霉孢子菌懸液置于⁶⁰Co-Y射線下方40CM處進行輻射誘變，采用15萬拉德誘變劑量的⁶⁰Co，并且持續輻射誘變30min，制得誘變紅曲霉孢子菌懸液，備用；

4)將步驟3)經過輻射誘變后的紅曲霉孢子菌懸液均勻灑在攤涼的大米粉上，通過手工翻拌2-3遍，保證紅曲霉孢子菌懸液均勻分別在大米粉上，然后將接種均勻的大米粉堆在紗網下，并加鋪毛毯，備用；

5)將步驟4)制得含有紅曲霉孢子菌懸液的大米粉在高溫房打堆，當室溫低于20℃時，在高溫房打堆；當室溫高于20℃時，在曲池打堆，并在打堆過程中，其堆厚35-40cm，表面覆以滅菌的毛氈保溫，保持室溫20-30℃，持續15-20小時，備用；

6)將步驟5)打堆完成的含有紅曲霉孢子菌懸液的大米粉進行攤堆，并在表面上噴施蒸餾水，使得大米粉保持約35％-55％的水分，并在室溫20-25℃的溫度培養4天，收集后送入烘干機內進行烘干，備用；

7)莫納克林K的提取：取步驟6)制得的大米粉碾碎，并采用75％乙醇回流提取3次，每次3小時，然后合并提取液并除去紅曲色素，最后將提取液進行濃縮，并通過測定吸光度計算莫納克林的含量，即得。

2.如權利要求1所述的一種高產莫納克林K的紅曲菌株培育方法，其特征在于：所述步驟2)中乙醇的濃度為95％。

3.如權利要求2所述的一種高產莫納克林K的紅曲菌株培育方法，其特征在于：所述步驟6)中的大米粉為紅曲米面團。