[發(fā)明專利]一種從動(dòng)物肝臟中提取肝素鈉和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)工藝

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711412290.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109957045A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳石良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陳石良
• 主分類號(hào): C08B37/10
• 分類號(hào): C08B37/10;C12P21/06;C07K1/34
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1.一種從動(dòng)物肝臟中提取肝素鈉和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于，包括以下步驟：

（1）打漿：取鮮鮮（或經(jīng)冷凍保存后自然解凍）動(dòng)物肝，清洗去血水，去除筋膜，用斬拌機(jī)絞碎成肉糜狀，再經(jīng)細(xì)磨機(jī)研磨勻漿5-10min，得到肝漿料；

（2）鹽解：往肝漿料中加入其重量3-5倍的去離子水，攪拌均勻后得肝漿液，往肝漿液中加入其重量3-6%的氯化鈉，緩慢升溫至40℃，用NaOH調(diào)pH值至8.5-9.0，攪拌下繼續(xù)升溫至50-55℃，保溫反應(yīng)3-6小時(shí)后，快速升溫至95℃，保溫10min，使蛋白質(zhì)高溫變性，冷卻至60℃，得到肝鹽解液；

（3）過(guò)濾：將肝鹽解液經(jīng)60目濾袋過(guò)濾，分別收集濾渣（Ⅰ）和濾液（Ⅰ）；

（4）酶解：調(diào)整濾液（Ⅰ）PH值至8.0-9.0，升溫至50-55℃，按每公斤肝添加6-10克蛋白酶的比例加入2709蛋白酶，保溫酶解3-5小時(shí)后，升溫至85℃，保溫30min滅酶，冷卻至60℃，用100目濾袋過(guò)濾，分別收集濾渣（Ⅱ）和濾液（Ⅱ）；

（5）吸附：將濾液（Ⅱ）經(jīng)去除表面油脂層后，升溫至45-60℃，按每公斤肝加入25-35g的D-254樹(shù)脂，攪拌狀態(tài)下保溫吸附處理8-10小時(shí)后，用100目濾袋過(guò)濾，分別收集濾液（Ⅲ）和吸附有肝素鈉的樹(shù)脂；

（6）洗脫：

（6-1）：將收集的樹(shù)脂先用水反復(fù)沖洗至水變清為止，濾干樹(shù)脂，再以完全浸沒(méi)樹(shù)脂為量，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-7%的氯化鈉溶液，溫度保持在45-55℃，攪拌30-60min，濾干得洗滌后的樹(shù)脂；

（6-2）：以完全浸沒(méi)洗滌后的樹(shù)脂為量，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20-25%的氯化鈉溶液，溫度保持在45-55℃，攪拌3-4小時(shí)后，分離樹(shù)脂，收集洗脫液；

（6-3）：重復(fù)步驟（6-2）一次，將兩次收集的洗脫液合并，并用100目濾袋過(guò)濾，收集洗脫液待用；

（7）酸處理：往洗脫液中加入其總重量0.1-0.3%的保護(hù)劑攪拌均勻后，用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.0-3.5，靜置10-15分鐘，用150目濾袋過(guò)濾，分別收集濾渣（Ⅲ）和濾液（Ⅳ）待用；

(8)堿處理：用NaOH調(diào)節(jié)濾液（Ⅳ）PH值至11.0，攪拌均勻后靜置15分鐘，用150目濾袋過(guò)濾，分別收集濾渣（Ⅳ）和濾液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：將濾液（Ⅴ）用稀鹽酸調(diào)節(jié)其PH值至7.0-8.0，加入其體積1.5-2.0倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80-85%的預(yù)冷過(guò)的乙醇，攪拌均勻后密封沉淀18-24小時(shí)，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）復(fù)沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的氯化鈉溶液，攪拌溶解后升溫至80℃，保溫處理10分鐘后，冷卻到60℃，用150目濾袋過(guò)濾，收集濾液（Ⅵ），往濾液（Ⅵ）中加入其體積1.0-1.5倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85-95%的預(yù)冷過(guò)的乙醇，攪拌均勻靜置30分鐘，虹吸法除去上層乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脫水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95-100%的乙醇脫水2-3次，收集沉淀物，置于60-70℃下干燥8-16小時(shí)即得肝素鈉；

（12）濾渣酶解：將步驟（3）中的濾渣（Ⅰ）、步驟（4）中的濾渣（Ⅱ）、步驟（7）中的濾渣（Ⅲ）和步驟（8）中的濾渣（Ⅳ）合并，加入合并濾渣重量1-3倍的去離子水溶解并攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH值至8.0～9.0，按每公斤濾渣加入堿性蛋白酶2.0-5.0克，加熱至40-50℃，保溫酶解3-5h，將酶解液升溫至85℃滅酶10分鐘，即得到肝蛋白酶解液；

（13）納濾脫鹽：將步驟（5）中的濾液（Ⅲ）與步驟（12）所得的肝蛋白酶解液合并，攪拌均勻后通過(guò)截留分子量為200Da的納濾膜裝置系統(tǒng)進(jìn)行納濾脫鹽、濃縮，收集濃縮液；

（14）噴霧干燥：將上述納濾濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得肝蛋白肽粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從動(dòng)物肝臟中提取肝素鈉和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于：步驟（7）所述的保護(hù)劑為亞硫酸氫鈉。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從動(dòng)物肝臟中提取肝素鈉和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于：步驟（12）所述的堿性蛋白酶為枯草桿菌堿性蛋白酶，酶活力為200000U/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從動(dòng)物肝臟中提取肝素鈉和蛋白肽的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于：步驟（14）所述的噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)口溫度為200-240℃，出風(fēng)口溫度為80—100℃。