[發明專利]一種無創產前親權鑒定方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201711408954.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108220453A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 李明明;張培培;李靜;陳昌岳;周孟麗;胡秋萍;張祥林
• 申請（專利權）人: 上海美吉生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6883;C12N5/073;C12N15/10
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1.一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)獲取孕婦外周血樣本；

(2)對樣本進行密度梯度離心操作；

(3)對步驟(2)處理所得細胞液進行白細胞去除處理，獲得相對富集的胎兒有核紅細胞懸液；

(4)對步驟(3)處理所得相對富集的胎兒有核紅細胞懸液進行免疫熒光染色、固定封片、有核紅細胞鑒定及捕獲，獲得單個有核紅細胞；

(5)對步驟(4)處理所得單個胎兒有核紅細胞進行單細胞擴增；

(6)步驟(5)處理所得擴增產物進行STR分型檢測及親權鑒定。

2.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述密度梯度離心為雙密度梯度離心。

3.如權利要求2所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述雙密度具體為：1.077/1.095g/ml。

4.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述密度梯度離心處理完畢，加入紅細胞超聚溶液，從而獲得純凈有核細胞懸液。

5.如權利要求4所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述紅細胞超聚溶液包括但不限于以下一種或幾種：HetaSep、羥乙基淀粉溶液。

6.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述密度梯度離心介質包括但不限于以下任一種：Ficoll、蔗糖，(N,N'-bis(2,3-dihydroxypropyl)-5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-2,4-6-triiodo-isophthalamide),OPTIPrep、Percoll。

7.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述密度梯度離心處理后所得相對富集的胎兒有核紅細胞懸液密度為1.077～1.095g/ml。

8.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，所述白細胞去除采用免疫磁珠負選進行。

9.如權利要求8所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述免疫磁珠包被的抗體包括但不限于以下一種或幾種：CD34，CD46，CD55，CD4，CD8，CD100，CD175s，HLA-DR，CD29，CD31，CD35，CD44，CD45，CD45RB，CD47，CD59，CD14，CD15，CD81，CD99，CD108。

10.如權利要求1所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，步驟(5)中，所述單細胞擴增方法包括如下步驟：細胞裂解；預擴增；終擴增。

11.如權利要求12所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述細胞裂解的裂解液包括第一引物。

12.如權利要求11所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述第一引物序列為如SEQ ID NO：1所示，具體為:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTACNNNNNNNN，其中所述NNNNNNNN為隨機引物序列或定向富集序列。

13.如權利要求12所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述隨機引物序列或定向富集序列的長度可以為4～20nt，優選地為4～10nt，更優選地為6～8nt。

14.如權利要求12所述的一種無創產前親權鑒定方法，其特征在于，所述終擴增的終擴增緩沖液包括第二引物，所述第二引物序列為如SEQ ID NO：2所示，具體為:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

15.一種無創產前親權鑒定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括包括：密度梯度離心介質、Percoll雙密度梯度分離液、紅細胞超聚溶液、免疫磁珠、第一隨機引物、細胞裂解液。