[發明專利]一種檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法

在審

• 申請號: 201711408636.X
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108159435A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 阿依姑麗·艾合麥提;戴小華;王娟
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K31/194
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法，該方法包括以下步驟：步驟1、動物分組及給藥；步驟2、口服糖耐量實驗；步驟3、動物的處死；步驟4、生化試驗及生理切片；步驟5、RT?PCR；步驟6、統計學分析。本發明對純品檸檬酸做了研究，在同時灌胃檸檬酸和高脂乳劑的情況下，通過檢測血脂、胰島素敏感指數、相關基因的表達以及靶器官組織細胞形態變化，探討檸檬酸是否能緩減或抑制小鼠產生胰島素抵抗，為后續野山杏總有機酸的研究提供一定依據。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法,具體地說，涉及一種檸檬酸對高脂乳誘導小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法。

背景技術

胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)是指外周組織及其靶器官對胰島素(Insulin，INS)的敏感性及反應性降低，即正常劑量的INS產生低于正常生物學效應的一種狀態。胰島素抵抗不僅是一種代謝疾病，而且是高血壓、高血脂、動脈粥樣硬化、冠心病等代謝疾病之間的紐帶，更是Ⅱ型糖尿病的發病基礎和伴隨性狀。近幾年胰島素抵抗患者人數成指數倍增加，如何防治胰島素抵抗具有重要的意義。

天然檸檬酸在自然界中分布很廣，天然的檸檬酸存在于植物的果實和動物的骨骼、肌肉、血液中。人工合成的檸檬酸是用砂糖、糖蜜、淀粉、葡萄等含糖物質發酵而制得的，可分為無水和水合物兩種。純品檸檬酸為無色透明結晶或白色粉末，無臭，有一種誘人的酸味。2006年-2016年，有關研究定量定性分析后認為，新疆哈密市伊吾縣的野山杏除含有多種維生素和人體所需的微量元素外，含量最多的是有機酸和黃酮兩種成分，且檸檬酸占總有機酸含量的50％以上。

目前，現有技術中，還沒有檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法，該方法對純品檸檬酸做了研究，在同時灌胃檸檬酸和高脂乳劑(HFE)的情況下，通過檢測血脂、胰島素敏感指數、胰島素抵抗指數以及相關基因的表達，探討檸檬酸是否能緩減或抑制高血脂誘導的小鼠產生胰島素抵抗，為后續野山杏總有機酸的研究提供一定依據。

其具體技術方案為：

一種檸檬酸對小鼠胰島素抵抗形成的影響的實驗方法，包括以下步驟：

步驟1、動物分組及給藥

昆明種小鼠，60只，雌雄對半，體重(20±2)g，由新疆醫科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(新)2016-0003。適應性飼養1周后，小鼠隨機分為6組，每組10只，即正常對照組，高脂血癥模型組，陽性對照組(給予血脂康)及檸檬酸(CA)高、中、低劑量組。正常對照組每日灌服相應體積的質量分數為0.5％CMC-Na溶液，其他組于每日上午均灌服劑量為20mL·Kg^-1·d^-1高脂乳劑；下午正常組和模型組自由飲水進食，陽性對照組灌服血脂康200mg·Kg^-1·d^-1，CA高、中、低劑量組分別給予100、50、10mg·Kg^-1·d^-1，連續給藥4周，給藥期間，自由進水，進食。

步驟2、口服糖耐量實驗

于實驗第28天，禁食12h，尾部采血測空腹血糖。給予Control組灌胃0.5％CMC-Na、HFE組灌胃高脂乳劑、血脂康組灌胃200mg g·kg^－1的血脂康及CA+HFE組灌胃高脂乳劑和不同劑量的檸檬酸，20min后各組小鼠灌胃2500mg·kg^－1的葡萄糖，測定0、15、30、60、120min的血糖值，并計算各組120min內的血糖曲線下面積。

步驟3、動物的處死

于實驗第30天，禁食12h，眼眶采血，制備血清，用于測定血清生化指標，快速解剖，取肝臟、骨骼肌，用于基因測序。