[發明專利]一種觀察生物大分子分布的方法及應用

有效

• 申請號: 201711407601.4
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108196057B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 石大川;張瑞巧;孫永紅;蔡葵;王文嬌;趙征宇;柳偉英
• 申請（專利權）人: 青島市農業科學研究院
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 肖太升;高洋

本發明公開了一種觀察生物大分子分布的方法及應用，屬于生物免疫檢測技術領域。本發明觀察生物大分子分布的方法，是使用改進的免疫熒光染色法使樣品中不同的生物大分子分別被不同的熒光或染料標記，根據標記的不同，在顯微鏡下同時觀察不同生物大分子的分布情況；所述改進的免疫熒光染色法為：對不同的生物大分子選擇不同免疫原的一抗標記或是對不同的生物大分子選擇相同免疫原但攜帶不同標簽的一抗標記；對不同的生物大分子分別選擇不同顏色標記且與相對應的一抗結合的二抗顯色。本發明的方法可使不同的分子標記不同的熒光，能夠直接觀察多種生物分子的分布，有利于發現分子間的相互作用。

技術領域

本發明屬于生物免疫檢測技術領域，具體涉及一種觀察生物大分子分布的方法及應用。

背景技術

我國是傳統的農業大國，對于農作物生長，發育等方面的研究一直是生物學和農學研究的重點和熱點。農作物生長發育的過程，從本質上說，就是植株中重要結構和組織的構建過程，從分子水平上看，就是包括多糖，蛋白質等生物大分子相互作用，相互影響的過程。對農作物進行基礎研究的關鍵，首先在于對這些生物大分子在植株中分布和結構的觀察過程。

免疫熒光抗體標記技術是將熒光素以化學方法與特異抗體共價結合，形成免疫標記抗體，并根據抗原-抗體特異結合的原理，以熒光素對抗原進行標記，并利用熒光顯微鏡觀察特定熒光，從而直觀觀察抗原在植株中的分布過程。由于抗原抗體作用具有識別的特異性，并且對于抗原組成沒有特定要求，因此，該技術在解析農作物植株結構組成方面具有廣泛的適用性。

目前，熒光抗體標記技術的應用已經日臻成熟，但是傳統的檢測方法決定了該項檢測的局限性，即通過免疫熒光觀測，僅能夠展示單一結構的分布部位，所得到的相關信息量偏小且單一，無法從整體上對于結構之間的相互作用和相對分布進行直觀的觀察，這極大地限制了這項技術的應用。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的技術方案如下：

一種觀察生物大分子分布的方法，使用改進的免疫熒光染色法使樣品中不同的生物大分子分別被不同的熒光或染料標記，根據標記的不同，在顯微鏡下同時觀察不同生物大分子的分布情況；

所述改進的免疫熒光染色法為：對不同的生物大分子選擇不同免疫原的一抗標記或是對不同的生物大分子選擇相同免疫原并攜帶不同標簽的一抗標記；對不同的生物大分子分別選擇不同顏色標記且與相對應的一抗結合的二抗顯色。

在上述方案的基礎上，所述生物大分子為糖類。

在上述方案的基礎上，所述的一抗為JIM系列抗體、LM系列抗體、CCRC系列抗體中的一種和CBM系列抗體中的一種的組合。

在上述方案的基礎上，所述二抗為Alexa Fluor系列熒光標記抗體。

在上述方案的基礎上，所述的樣品為組織切片或具有良好滲透性的完整或部分植物組織。

在上述方案的基礎上，所述觀察生物大分子分布的方法，步驟如下：

1)材料的選擇

選擇組織切片或具有良好滲透性的完整或部分植物組織；

2)封閉

封閉液封閉樣品恒溫水平搖動1h，移除封閉液，PE緩沖液清洗。

3)一抗免疫標記

a.根據所需檢測的多糖種類選擇相應的一抗，將選擇的一抗配置成一抗工作液，對樣品進行結合；

b.移除一抗工作液，PE緩沖液清洗；

4)二抗免疫標記

①JIM/LM+CBM作為一抗時

a.向樣品中加入小鼠抗His的抗體工作液，恒溫水平搖動0.5h；