[發明專利]一種觀察生物大分子分布的方法及應用

有效

• 申請號: 201711407601.4
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108196057B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 石大川;張瑞巧;孫永紅;蔡葵;王文嬌;趙征宇;柳偉英
• 申請（專利權）人: 青島市農業科學研究院
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 肖太升;高洋

1.一種觀察生物大分子分布的方法，其特征在于：步驟如下：

1)材料的選擇

選擇組織切片或具有良好滲透性的完整或部分植物組織；

2)封閉

封閉液封閉樣品恒溫水平搖動1h，移除封閉液，PE緩沖液清洗；

3)一抗免疫標記

a.根據所需檢測的多糖種類選擇相應的一抗，將選擇的一抗配置成一抗工作液，對樣品進行結合；

b.移除一抗工作液，PE緩沖液清洗；

4)二抗免疫標記

①JIM/LM+CBM作為一抗時

a.向樣品中加入小鼠抗His的抗體工作液，恒溫水平搖動0.5h；

b.移除小鼠抗His的抗體工作液，PE緩沖液清洗三次，每次10分鐘；

c.將配制的Alexa Fluor-488標記的驢抗大鼠抗體以及Alexa Fluor-647標記的驢抗小鼠抗體的混合二抗工作液，對樣品進行結合，恒溫水平搖動0.5h；

d.移除二抗工作液，PE緩沖液清洗三次，每次10分鐘；

②CCRC+CBM作為一抗時

a.Alexa Fluor-488標記的驢抗小鼠抗體工作液對樣品進行結合，恒溫水平搖動0.5h；

b.移除工作液，PE緩沖液清洗三次，每次10分鐘；

c.小鼠抗His的抗體工作液對樣品進行結合，恒溫水平搖動0.5h；

d.移除工作液，PE緩沖液清洗三次，每次10分鐘；

e.Alexa Fluor-647標記的驢抗小鼠抗體工作液對樣品進行結合，恒溫水平搖動0.5h；

f.移除工作液，PE緩沖液清洗三次，每次10分鐘；

5)顯色

上述處理完的樣品均加Calcofluor White工作液對樣品染色15分鐘；

6)圖像獲取

將顯色后的樣品滴加PE緩沖液于共聚焦顯微鏡下觀察；

所述生物大分子為植物多糖；

所述的恒溫水平搖動為37℃，50rpm；

所述一抗的結合為37℃，50rpm恒溫水平搖動0.8h。

2.根據權利要求1所述觀察生物大分子分布的方法，其特征在于：所述一抗工作液和二抗工作液是由各抗體按1∶1的體積比混合而成。

3.一種觀察生物大分子分布的試劑盒，其特征在于：包括封閉液、PE緩沖液、一抗、二抗、小鼠抗His的抗體和顯色液；

所述的一抗為JIM系列抗體、LM系列抗體、CCRC系列抗體中的一種和CBM系列抗體中的一種的組合；

所述二抗為Alexa Fluor系列熒光標記抗體；

所述顯色液為Calcofluor White工作液。