[發(fā)明專(zhuān)利]一種UPLC-MS-MS快速篩查延胡索與醋延胡索差異性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711406481.6
• 申請(qǐng)日: 2017-12-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107957471B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黎曉麗;王長(zhǎng)軍;索彩仙;梁慧;李國(guó)衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東一方制藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 廣州致信偉盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44253
• 代理人: 彭玲

1.一種UPLC-MS-MS快速篩查延胡索與醋延胡索差異性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）收集待區(qū)分的延胡索與醋延胡索藥材，將相同炮制方法的不同批次的延胡索與醋延胡索藥材各分為一組，將每組延胡索與醋延胡索藥材制成相應(yīng)的延胡索標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品和醋延胡索標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，粉碎，過(guò)60目篩，于-20℃下避光保存；所述延胡索和醋延胡索標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品是通過(guò)如下方法得到的：

分別取延胡索和醋延胡索藥材，各加水煎煮兩次，第一次加8-10倍量水，浸泡30分鐘，武火煮沸后文火保持微沸20-40分鐘，煎液經(jīng)350目篩網(wǎng)趁熱過(guò)濾，濾液迅速用冷水冷卻；第二次加6-8倍量水，武火煮沸后文火保持微沸20-30分鐘，煎液經(jīng)100-350目篩網(wǎng)趁熱過(guò)濾，濾液迅速冷水冷卻，合并兩次濾液，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.04~1.06g/ml，冷凍干燥，即得；

（2）取步驟（1）的延胡索和醋延胡索標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品各0.2g，精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，得到供試品溶液，隨后進(jìn)入U(xiǎn)PLC-MS-MS系統(tǒng)進(jìn)行分析，得到每個(gè)延胡索和醋延胡索標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)；

步驟（2）中，所述UPLC-MS-MS系統(tǒng)的分析條件為：

色譜條件：C18色譜柱，以含5mM 甲酸銨的0.2%氨水為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫如下表所示；流速：0.4ml/min；柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；理論板數(shù)按延胡索乙素計(jì)算應(yīng)不低于3000；

時(shí)間(min)	A	B
0	95	5
2.0	90	10
20.0	75	25
26.0	2	98
28.0	2	98
28.1	95	5
30.0	95	5

質(zhì)譜條件：

MS系統(tǒng): Q Exactive Focus 四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱高分辨串聯(lián)質(zhì)譜，離子化模式:ESI^– & ESI⁺，錐孔電壓:正/負(fù)3500/3200V；蒸發(fā)器溫度：350℃；毛細(xì)管溫度：320℃；全掃描：掃描范圍為分子量100~1500，一級(jí)質(zhì)譜分辨率70000，二級(jí)質(zhì)譜分辨率為17500；

（3）將步驟（2）采集的數(shù)據(jù)直接導(dǎo)入至Compound Discoverer2.1，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，針對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行色譜峰提取和質(zhì)譜信息表征；

（4）選擇物質(zhì)色譜峰數(shù)量最多的樣品作為參照樣品，采用動(dòng)態(tài)規(guī)劃計(jì)算法校正樣品間的色譜峰漂移，對(duì)齊屬于同一物質(zhì)的色譜峰，然后利用最鄰近聚類(lèi)方法將保留時(shí)間較為接近的物質(zhì)注冊(cè)成為一個(gè)化合物，最終建立一個(gè)樣品和色譜峰的注冊(cè)圖表；經(jīng)過(guò)外標(biāo)校正后，用于后續(xù)的分析；

（5）利用方差分析計(jì)算樣品間差異性的物質(zhì)，置信水平閾值設(shè)定為0.05，將置信水平小于0.05的物質(zhì)視作差異性化合物，將所有差異性物質(zhì)的質(zhì)譜信息的原始文件直接導(dǎo)入到Compound Discoverer2.1庫(kù)中進(jìn)行匹配，確定物質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而得到差異性物質(zhì)；然后通過(guò)色譜的峰面積和出峰保留時(shí)間對(duì)應(yīng)的準(zhǔn)分子離子峰的質(zhì)量數(shù)確定延胡索與醋延胡索的差異性。