[發明專利]一種單細胞全基因組擴增試劑盒

在審

• 申請號: 201711405983.7
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108165610A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 李靜;陳昌岳;李明明;趙慧茹;鄭冠濤;路遠;胡秋萍;張祥林
• 申請（專利權）人: 上海美吉生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/6806;C12N15/10
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1.一種單細胞全基因組擴增試劑盒，所述試劑盒包括：細胞裂解液、細胞裂解酶、磁珠、校正酶、反應終止液、預擴增緩沖液、終擴增緩沖液。

2.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述細胞裂解液包括但不限于以下任一種：50mM KAc、20mM Tris-Ac、10mM MgAc、0.2％Trition X-100；1xPBS、1xThermo polbuffer、30mM Tris-HCl；10mM Tris-HCl、25mM EDTA、100mM NaCl；0.5％SDS、10mM Tris-HCl、50mM KCl；10mM Tris-HCl、100mM EDTA、0.5％SDS；30mM Tris-HCl、10mM EDTA、1％SDS；30mM Tris-HCl、2mM KCl、0.2％Triton X-100。

3.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述校正酶為具有DNA糖基化酶活性的酶。

4.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述校正酶包括但不限于以下一種或幾種：UDG酶、核酸外切酶Ⅷ、單鏈選擇性尿嘧啶-DNA糖基化酶、TU錯配DNA糖基化酶、具有甲基結合域的尿嘧啶-DNA糖基化酶。

5.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述反應終止液包括：尿嘧啶-糖基化酶抑制劑。

6.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述預擴增緩沖液包括DNA聚合酶、BSA、dNTP、DNA聚合酶、無核酸水、第一隨機引物。

7.如權利要求6所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述第一隨機引物結構為：第一引物固定序列-第一引物隨機序列-第一引物三聯重復序列，其中所述第一引物固定序列如SEQ ID NO：1所示，具體為ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

8.如權利要求7所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述第一引物隨機序列長度為4～20nt，優選地為4～10nt，更優選地為6～8nt。

9.如權利要求1所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述終擴增緩沖液包括DNA聚合酶、BSA、dNTP、DNA聚合酶、無核酸水、第二隨機引物。

10.如權利要求9所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述第二隨機引物結構為：第二引物固定序列-第二引物隨機序列-第二引物三聯重復序列，其中所述第二引物固定序列如SEQ ID NO：2所示，具為:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

11.如權利要求10所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述第二引物隨機序列長度為4～20nt，優選地為4～10nt，更優選地為6～8nt。

12.如權利要求7或10所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述第一引物中的三聯重復序列為TTT，則所述第二引物中的三聯重復序列GGG；所述第一引物中的三聯重復序列為AAA，則所述第二引物中的三聯重復序列

GGG；所述第一引物中的三聯重復序列為TTT，則所述第二引物中的三聯重復序列CCC；所述第一引物中的三聯重復序列為AAA，則所述第二引物中的三聯重復序列CCC。

13.如權利要求6或9所述的一種單細胞全基因組擴增試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶包括但不限于以下一種或幾種：vent DNA聚合酶、T7 DNA聚合酶、Bsu DNA聚合酶，大片段、T4 DNA聚合酶、DNA聚合酶I、(Klenow)大片段、DNA聚合酶I(E.coli)、Therminator^TMDNA聚合酶、Sulfolobus DNA聚合酶IV、phi29 DNA聚合酶、Bst2.0DNA聚合酶、Bst2.0 DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶，全長、Bst DNA聚合酶、Deep VentR^TMDNA聚合酶、VentR(exo–)DNA聚合酶、DNA聚合酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶大片段、Taq DNA聚合酶(提供不含鎂離子的ThermoPol II緩沖液)、Taq DNA聚合酶(提供緩沖液)、熱啟動DNA聚合酶、DNA聚合酶、熱啟動Flex DNA聚合酶、超保真DNA聚合酶、熱啟動超保真DNA聚合酶、超保真DNA聚合酶、KAPA HiFi Uracil+ReadyMix(2x)、PfuTurbo Cx熱啟動DNA聚合酶。