[發明專利]測定鋁鹽吸附型DTap-IPV聯合疫苗中D-抗原含量的方法

在審

• 申請號: 201711405907.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108226480A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 尹珊珊;殷建齊;鄧海清;任玉瑩;王婷婷;張現臣;劉建凱
• 申請（專利權）人: 北京民海生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明公開了一種用于解吸附鋁鹽吸附型DTap?IPV聯合疫苗中D?抗原的解吸附劑，其為含有至少一種表面活性劑的檸檬酸鹽溶液。基于該解吸附劑，本發明建立了一種測定鋁鹽吸附型DTap?IPV聯合疫苗中D?抗原含量的方法。該方法涉及的樣品處理過程減少了鋁鹽佐劑對吸附型DTap?IPV聯合疫苗中D?抗原含量檢測的干擾，具有重復性高、準確度高、特異性好的特點，為鋁鹽吸附型DTap?IPV疫苗的質量控制提供參考。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體地說，涉及一種測定鋁鹽吸附型DTap-IPV聯合疫苗中D-抗原含量的方法。

背景技術

脊髓灰質炎D-抗原是DTap-IPV疫苗(百白破-脊髓灰質炎聯合疫苗)的主要有效成分，其有效成分含量與疫苗的保護效果有關，因此，D-抗原含量是DTap-IPV疫苗質量控制的重要一項。

目前，D-抗原含量的檢測采用酶聯免疫吸附法，其原理是將脊髓灰質炎多抗吸附在酶聯反應板上，使供試品中的待檢抗原與其發生特異結合，再加入酶標抗體，使其與吸附在酶標板上的抗原結合形成免疫復合物，通過酶反應底物在酶的作用下產生顯色反應，并根據顏色變化對供試品種的抗原做定量分析。但是其檢測結果易受佐劑等非抗原物質的干擾。而DTap-IPV疫苗為氫氧化鋁吸附型疫苗。氫氧化鋁佐劑與抗原表面攜帶的負電荷基團發生共價或配位結合，以顆粒的方式包裹抗原，與可溶性抗原一起形成沉淀，從而使復合物更具免疫性。氫氧化鋁與抗原結合屏蔽了抗原表面的特異性結合位點，進而在抗原的體外檢測過程中，抗原無法與酶聯反應或酶標抗體上的特異抗體相結合，從而導致抗原檢出量偏低。

因此，有必要針對脊髓灰質炎病毒抗原與氫氧化鋁佐劑之間的吸附，開發一種解吸附液，從而使其可以破壞抗原與佐劑之間的作用力，在短時間內解離抗原，并通過酶聯免疫法對解離后的脊髓灰質炎病毒抗原進行準確定量。

發明內容

本發明要解決的技術問題是準確檢測出鋁鹽吸附型DTap-IPV聯合疫苗中脊髓灰質炎的D-抗原含量，進行有效地質量控制。

為了實現本發明目的，本發明首先提供一種用于解吸附鋁鹽吸附型DTap-IPV聯合疫苗中D-抗原的解吸附劑，其為含有至少一種表面活性劑的檸檬酸鹽溶液。

所述檸檬酸鹽溶液為5％-30％(優選20％)的檸檬酸鈉溶液。

所述表面活性劑為非離子型表面活性劑，優選TritonX-100。

所述表面活性劑在檸檬酸鹽溶液中的終濃度為0.05％-0.2％，優選0.1％。

此外，一些金屬離子螯合劑、有機酸、乙二醇等物質可以針對抗原與佐劑之間存在的一種或幾種相互作用力進行破壞，達到解離抗原的目的。上述物質可以替代表面活性劑用于解吸附劑制備中。

在本發明的一個具體實施方式中，所述解吸附劑為含有TritonX-100的20％檸檬酸鈉溶液，TritonX-100的終濃度為0.1％。

所述解吸附劑可按如下方法配制：①稱取1g TritonX-100，用10mL純化水溶解，混勻，即為10％TritonX-100溶液；②稱取4g檸檬酸鈉，用純化水溶解，加入10％TritonX-1000.4mL，補加純化水至20mL，即為解吸附劑。

本發明還提供一種用于測定鋁鹽吸附型DTap-IPV聯合疫苗中D-抗原含量的方法，其是利用所述解吸附劑處理待測疫苗，并測定混合液中的D-抗原含量。

所述方法包括以下步驟：

(1)將待測疫苗配制成溶液，并與解吸附劑混勻后孵育；

(2)采用酶聯免疫吸附法檢測(1)所得混合液中的D-抗原含量。