[發(fā)明專利]綿羊B4GALNT2基因全長序列的擴(kuò)增及其表達(dá)量的檢測

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711405165.7
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108085324B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 儲明星;郭曉飛;王翔宇;狄冉;劉秋月;胡文萍;梁奔夢;李曉雨;賀小云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/113;C12Q1/686;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)，具體公開了綿羊B4GALNT2基因全長序列的擴(kuò)增及其表達(dá)量的檢測。所述綿羊B4GALNT2基因全長序列的核苷酸序列或其反義核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明首次從體外培養(yǎng)的綿羊顆粒細(xì)胞的RNA中克隆到了B4GALNT2基因全長cDNA序列，并為該基因表達(dá)量檢測提供方法，為綿羊B4GALNT2基因功能尤其在卵巢組織中調(diào)控排卵機(jī)制的研究奠定序列信息基礎(chǔ)，并對了解雌性綿羊排卵數(shù)差異具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)，具體地說，涉及綿羊B4GALNT2基因全長序列的擴(kuò)增及其表達(dá)量的檢測。

背景技術(shù)

B4GALNT2基因是β-1,4-N-乙酰基-半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶2基因的簡稱，該基因所表達(dá)的蛋白在體內(nèi)主要行使蛋白修飾的功能作用，屬于蛋白糖基化通路重要組成部分；可將體內(nèi)β-1,4連接的N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移至α-2,3-唾液酸化鏈的半乳糖殘基上，完成相應(yīng)抗原蛋白修飾等。

目前針對B4GALNT2基因的研究集中在綿羊繁殖性能的調(diào)控機(jī)理和多羔表型性狀主效基因的挖掘。法國的肉用綿羊品系-Lacaune綿羊可通過DLX3:c.*803AG連鎖突變來判斷其產(chǎn)羔和排卵數(shù)潛能，Lacaune綿羊也被認(rèn)為存在一個(gè)控制排卵數(shù)的主效基因-FecL。隨后，法國農(nóng)業(yè)科學(xué)院的最新研究表明：位于B4GALNT2基因第7內(nèi)含子中的SNP g.36938224TA突變和與EZR基因間區(qū)的SNP g.37034573AG突變與產(chǎn)羔和排卵數(shù)性狀緊密相關(guān)，從而推測B4GALNT2基因是控制Lacaune綿羊高繁殖力性狀的主效基因。小鼠的B4GALNT2蛋白也被證明在卵丘細(xì)胞群的擴(kuò)增中發(fā)揮著重要作用。因而，在未來的綿羊繁殖調(diào)控作用的研究中，B4GALNT2基因可能是重要的研究節(jié)點(diǎn)。

然而，現(xiàn)有的NCBI中的綿羊B4GALNT2基因僅公布了一個(gè)起始轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)(登錄號：NM_001318076.1)，其公布的B4GALNT2基因的3’端序列不夠完整，且未通過NCBI的最終審查。該序列擴(kuò)增來自于法國綿羊品種Lacaune，而本發(fā)明的序列擴(kuò)增來源于中國著名的多羔綿羊品種-小尾寒羊。世界綿羊具有多個(gè)起源，綿羊群體間LD值很小，說明群體間存在較大的變異，為更加精確地研究國內(nèi)綿羊品種中的B4GALNT2基因，需要建立單獨(dú)的mRNA序列。未見B4GALNT2基因在各物種中的全長序列擴(kuò)增，其原因可能在于該基因的3’端序列較長，且3’端RACE引物設(shè)計(jì)較為困難。

針對綿羊物種，B4GALNT2基因作為高繁殖力基因FecL的候選基因，故該基因的擴(kuò)增方法以及對其表達(dá)檢測的方法將為后續(xù)的研究奠定良好的基礎(chǔ)。因此，亟需提供綿羊B4GALNT2基因全長序列的擴(kuò)增方法及其表達(dá)量的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供綿羊B4GALNT2基因全長序列的擴(kuò)增及其表達(dá)量的檢測。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

第一方面，本發(fā)明提供了綿羊B4GALNT2基因的全長序列，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本發(fā)明針對NM_001318076.1序列，先對3’端的參考序列進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增，進(jìn)一步延伸后，再設(shè)計(jì)相應(yīng)的3’端RACE引物，最終獲得了更為完整的B4GALNT2基因3’端序列。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，提供了B4GALNT2基因的全長序列，尤其是B4GALNT2基因的3’端序列。miRNA在基因表達(dá)調(diào)控中扮演著重要角色，它可以通過與mRNA的3’端非翻譯區(qū)作用從而在轉(zhuǎn)錄后水平上介導(dǎo)mRNA的翻譯，B4GALNT2基因3’端序列的獲得將有利于miRNA對其調(diào)控作用的研究。