[發(fā)明專利]Gal4溫敏型突變體、重組表達(dá)載體、溫度調(diào)控系統(tǒng)及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711403958.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN107987138B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于洪巍;周萍萍;葉麗丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/395
• 分類號(hào): C07K14/395;C12N15/31;C12N15/81;C12N1/19;C12P23/00;C12P5/02;C12R1/865
• 代理公司: 杭州裕陽聯(lián)合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 姚宇吉

1.Gal4溫敏型突變體，其特征在于：所述突變體的氨基酸序列選自以下序列：

序列表中SEQ ID NO:6的氨基酸序列；

序列表中SEQ ID NO:7的氨基酸序列；

序列表中SEQ ID NO:8的氨基酸序列；

序列表中SEQ ID NO:9的氨基酸序列；

序列表中SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Gal4溫敏型突變體，其特征在于，編碼Gal4溫敏型突變體的核苷酸序列選自下列序列：

SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；

SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列；

SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。

3.重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體包含權(quán)利要求2所述的核苷酸序列。

4.基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至宿主微生物中獲得。

5.利用如權(quán)利要求1所述的Gal4溫敏型突變體在釀酒酵母中構(gòu)建溫度調(diào)控系統(tǒng)的方法，其特征在于，首先敲除釀酒酵母染色體上GAL80基因，使GAL系統(tǒng)不再受半乳糖控制，進(jìn)一步用HIS3標(biāo)簽敲除GAL4基因；然后將權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體整合到酵母染色體中，構(gòu)建溫度敏感的GAL系統(tǒng)。

6.Gal4溫敏型突變體在釀酒酵母中構(gòu)建的溫度調(diào)控系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)采用權(quán)利要求5的方法構(gòu)建。

7.如權(quán)利要求6所述的Gal4溫敏型突變體在釀酒酵母中構(gòu)建的溫度調(diào)控系統(tǒng)在類胡蘿卜素合成中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的Gal4溫敏型突變體在釀酒酵母中構(gòu)建的溫度調(diào)控系統(tǒng)在類胡蘿卜素合成中的應(yīng)用，其特征在于，將類胡蘿卜素合成途徑中的基因置于GAL1-GAL10啟動(dòng)子后，構(gòu)建產(chǎn)類胡蘿卜素的釀酒酵母工程菌株，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)類胡蘿卜素的工程菌株的生長階段和產(chǎn)物合成階段的分階段調(diào)控。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的Gal4溫敏型突變體在釀酒酵母中構(gòu)建的溫度調(diào)控系統(tǒng)在類胡蘿卜素合成中的應(yīng)用，其特征在于，所述類胡蘿卜素為蝦青素或番茄紅素。