[發明專利]一種肌鈣蛋白I檢測試劑及其制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201711403111.7
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108037282A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 丁蘭艷;趙慧敏;嚴芳芳;王亞盟;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑，其特征在于，包括：酶標肌鈣蛋白I、用于檢測肌鈣蛋白I抗體—酶標肌鈣蛋白I復合物的指示試劑。

2.根據權利要求1所述的一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑，其特征在于：所述酶標肌鈣蛋白I由肌鈣蛋白I和葡萄糖脫氫酶偶聯而成。

3.根據權利要求1所述的一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑，其特征在于：上述指示試劑選自酶試劑，所述的酶試劑由肌鈣蛋白I酶標偶聯物和酶的底物組成，酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶-肌鈣蛋白I酶標偶聯物，酶的底物為葡萄糖。

4.一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）葡萄糖脫氫酶—酶標抗原偶聯物的制備：制備葡萄糖脫氫酶溶液，活化肌鈣蛋白I，使葡萄糖脫氫酶與肌鈣蛋白I偶聯；

（2）肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑的制備：

試劑1的制備：由肌鈣蛋白I抗體和均相酶底物混合而成；

試劑2的制備：由葡萄糖脫氫酶—酶標抗原偶聯物與磷酸鹽緩沖液混合而成。

5.根據權利要求4所述的一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟（1）具體過程如下：

1）葡萄糖脫氫酶（GDH）溶液的制備：

a. 稱取10.5mg的GDH，其規格為100KU，室溫溶解于12mL含有72.6mg（50mM）Tris、8mgMgCl2（3.3mM）和100mg NaCl的溶液中, 調節該溶液的pH=8.0；

b. 加入225mg還原態的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH），95mg葡萄糖以及0.75mL 的卡必醇；

c. 逐滴加入2mL二甲基亞砜；

2）肌鈣蛋白I的活化

a. 稱取10mg的肌鈣蛋白I溶解于1mL PH=6.0的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)中，震蕩混合混勻；

b. 稱取10mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（EDC）溶于1mL的MES中，震蕩混合均勻；

c. 用移液槍吸取200μL的EDC溶液緩慢滴加入肌鈣蛋白I溶液中旋轉混合30分鐘；

3）葡萄糖脫氫酶與肌鈣蛋白I的偶聯

a. 將上述活化好的肌鈣蛋白I溶液緩慢滴加到上述葡萄糖脫氫酶溶液中；

b. 攪拌2小時。

6.根據權利要求4所述的一種肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）的具體過程如下：

試劑1的制備：將3.946g（11mM）氧化態的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）、1.980g（11mM）葡萄糖用1L 50mM、pH=8.0的磷酸鹽緩沖液溶解制成均相酶底物；將制備的肌鈣蛋白I抗體加到上述均相酶底物中，抗體與均相酶底物的體積比為1:100～1:10000 ；

試劑2的制備：將制備的葡萄糖脫氫酶—酶標抗原偶聯物加到50mM、pH=8.0 的磷酸鹽緩沖液中，上述偶聯物與磷酸鹽緩沖液的體積比為1:100～1:10000。

7.利用權利要求1至3任意一項所述的肌鈣蛋白I均相酶免疫檢測試劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將待測樣本與肌鈣蛋白I抗體接觸；

2）根據待測樣本中肌鈣蛋白I與肌鈣蛋白I抗體的結合情況，利用指示試劑判斷樣本中肌鈣蛋白I的含量；所述待測樣本為血清、血漿、唾液或尿液。