[發明專利]一種癌胚抗原(CEA)免疫檢測試劑及其制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201711403096.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108152491A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 嚴芳芳;王亞盟;丁蘭艷;趙慧敏;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種癌胚抗原(CEA)免疫檢測試劑，其特征在于，包括：癌胚抗原特異性抗體、用于檢測癌胚抗原特異性抗體-癌胚抗原復合物的指示劑。

2.根據權利要求1所述的癌胚抗原免疫檢測試劑，其特征在于，所述用于檢測癌胚抗原特異性抗體-癌胚抗原復合物的指示劑選自酶試劑、放射性同位素、熒光試劑或發光試劑中的一種，優選為酶試劑；所述的酶試劑由癌胚抗原酶標偶聯物和酶的底物組成，酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物，酶的底物為葡萄糖。

3.根據權利要求2所述的癌胚抗原免疫檢測試劑，其特征在于，所述酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶和癌胚抗原偶聯形成。

4.一種癌胚抗原免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1) 均相酶底物溶液的制備：將NAD⁺和葡萄糖用TRIS緩沖液溶解，配制得到均相酶底物；

(2) 葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物的制備：制備葡萄糖脫氫酶溶液(GDH)，將GDH與癌胚抗原偶聯，純化偶聯產物；

(3) 癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑的制備：

試劑1(R1)：由TRIS緩沖液、癌胚抗原特異性抗體、均相酶底物混合而成；

試劑2(R2)：由TRIS緩沖液、葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物混合而成。

5.根據權利要求4所述的一種癌胚抗原免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟(1)具體過程為：

將氧化態的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD⁺、葡萄糖用55mM、pH=8.0的TRIS緩沖液溶解制成均相酶底物；所述NAD⁺與葡萄糖的最終濃度均為22.50 mM。

6.根據權利要求4所述的一種癌胚抗原免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟(2)具體過程為：

1) 葡萄糖脫氫酶溶液的制備：

a. 稱取8mg MgCl₂、100mg NaCl 和15.6mg的葡萄糖脫氫酶(100KU)，室溫下按順序溶解于18ml 50mM pH=9.0的TRIS緩沖液；

b. 按順序加入337.5mg還原態的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH、140.2mg葡萄糖以及1.125mL卡必醇；

c. 逐滴加入3mL的二甲亞砜；

2) 葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物的制備：

將癌胚抗原逐滴加入上述制得的葡萄糖脫氫酶溶液中，2-8℃攪拌過夜；所述癌胚抗原與葡萄糖脫氫酶的質量比為1:1000-1000:1；最后，通過G-25凝膠層析柱純化酶標偶聯物，于2-8℃下儲存。

7.根據權利要求4所述的一種癌胚抗原免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟(3)具體過程為：

試劑1：將癌胚抗原抗體加入到權利要求5所述的均相酶底物中，抗體與均相酶底物體積比為1:100-1:10000，優選1:1000；

試劑2：將葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物加到120mM pH=8.2的TRIS緩沖液中，上述偶聯物與TRIS緩沖液的體積比為1:100-1:10000，優選1:3000。

8.利用權利要求1至3任意一項所述的癌胚抗原免疫檢測試劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1) 將待測樣本與癌胚抗原特異性抗體接觸；

2) 根據待測樣本中癌胚抗原與癌胚抗原特異性抗體的結合情況，利用指示劑判斷樣本中癌胚抗原的含量；所述待測樣本為各種生理樣本，例如血清、血漿、唾液或尿液等；優選的，待測樣本為EDTA抗凝血漿。