[發明專利]一種癌胚抗原(CEA)免疫檢測試劑及其制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201711403096.6
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108152491A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 嚴芳芳;王亞盟;丁蘭艷;趙慧敏;杜愛銘;徐兵
• 申請（專利權）人: 太原瑞盛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種癌胚抗原(CEA)檢測試劑及其制備和檢測方法，屬于免疫檢測領域。具體涉及一種癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑及其制備和檢測方法，所述試劑包括：癌胚抗原特異性抗體、用于檢測癌胚抗原特異性抗體?癌胚抗原復合物的指示劑；上述指示劑選自酶試劑，所述酶試劑由癌胚抗原酶標偶聯物和酶的底物組成，酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶?癌胚抗原酶標偶聯物，酶的底物為葡萄糖。本發明癌胚抗原免疫檢測試劑靈敏度高、重復性好、穩定性強，并且可以在全自動生化分析儀上同時測定多個樣本，實現癌胚抗原的高通量、快速化測定，有利于臨床大規模推廣使用。

技術領域

本發明涉及一種癌胚抗原檢測試劑及其制備和檢測方法，具體涉及一種癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑及其制備和檢測方法。

技術背景

癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)是由Gold和Freeman等于1965年首次于結腸癌和胎兒腸組織中發現。在胚胎發育過程中，CEA作為細胞表面蛋白，主要形成于胃腸道和胰腺，并分泌于體液中。成人CEA的合成并未完全停止，也存在于許多與胃腸或肺來源有關的外胚層組織的癌細胞中。CEA主要在肝臟內滅活，半衰期為14d，生物活性目前仍不清楚，但可能與免疫抑制細胞的粘附有關。

CEA是由45%-55%糖和50%蛋白質組成的瘤胎糖蛋白，相對分子質量為180-200kD，有9個抗原決定簇，其基因家族包括2個亞組的17個活化基因，屬于非器官特異性腫瘤相關抗原。血清CEA升高主要見于：70%-90%的結腸腺癌患者CEA陽性，在其他惡性腫瘤中的陽性率順序為胃癌、胰腺癌、小腸腺癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、泌尿系癌腫。良性腫瘤、炎癥和退行性疾病（例如膽汁淤積、結腸息肉、酒精性肝硬化患者、慢性肝炎、胰腺炎、潰瘍性結腸炎、肺氣腫）CEA含量會輕度或中度上升，但通常不超過10ng/ml。吸煙者中約有30%CEA大于5ng/ml。CEA可以作為良性與惡性腫瘤的鑒別診斷依據，其測定還用于指導腫瘤治療及隨訪，能為病情判斷、預后及療效觀察提供重要依據。

檢測CEA的常用方法有放射免疫法(RIA)、化學發光法、電化學發光法、金標記免疫滲濾層析、時間分辨熒光免疫分析法及酶聯免疫吸附法(ELISA)等。放射免疫法最早用于CEA的檢測，但在檢測過程中容易產生放射性污染，且準確度低，需要專業的放射免疫儀器，在普通實驗室難以開展，現階段已很少使用。其余方法中，或者步驟繁瑣，或者耗時較長，或者需要復雜昂貴的儀器設備，或者需要專業操作人員等，都不利于廣泛應用于臨床檢測。

均相酶免疫檢測法靈敏度高、重復性好、穩定性強，操作簡便并且可以在全自動生化分析儀上同時測定多個樣品，實現癌胚抗原的高通量、快速化測定，有利于臨床大規模推廣使用。

發明內容

本發明為了克服現有技術存在的缺陷，采用癌胚抗原特異性抗體及指示劑制備出癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑，該試劑可與各種類型自動生化分析儀聯用，有助于實現癌胚抗原高通量、快速化檢測，且對檢測人員要求不高，有利于臨床推廣。

本發明的目的在于提供一種癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑，其特征在于：含有癌胚抗原特異性抗體和指示劑。

所述指示劑為酶試劑，其由癌胚抗原酶標偶聯物和酶的底物組成，酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物，酶的底物為葡萄糖。

所述的酶標偶聯物為葡萄糖脫氫酶和癌胚抗原偶聯形成。

一種癌胚抗原免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1) 均相酶底物溶液的制備：將NAD⁺和葡萄糖用TRIS緩沖液溶解，配制得到均相酶底物；

(2) 葡萄糖脫氫酶-癌胚抗原酶標偶聯物的制備：制備葡萄糖脫氫酶溶液(GDH)，將GDH與癌胚抗原偶聯，純化偶聯產物；

(3) 癌胚抗原均相酶免疫檢測試劑的制備：