[發(fā)明專利]一種預(yù)儲(chǔ)存試劑微珠的多孔板及其制備和使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711397425.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN108267570B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜文斌;奕巧蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京達(dá)微生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/48
• 分類號(hào): G01N33/48;G01N35/00;B01L3/02
• 代理公司: 北京唐頌永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

本發(fā)明提供一種預(yù)儲(chǔ)存試劑微珠的反應(yīng)篩選多孔板及其制備和使用方法，所述的多孔板包括：多孔板的容器中充滿第一種液體，并在其底部預(yù)先引入一個(gè)負(fù)載試劑的微珠。負(fù)載試劑的微珠可以是固態(tài)微球、微液滴或兩者的任意組合。所述的第一種液體與負(fù)載試劑的微珠不互溶。所述多孔板封膜保存，用戶使用時(shí)無需配制和添加篩選試劑。該預(yù)存儲(chǔ)試劑微珠可以大大減少試劑和樣品的消耗量，試劑微珠方便與后續(xù)引入微量樣品的混合反應(yīng)，可以將常規(guī)篩選反應(yīng)的體積降低2至3個(gè)數(shù)量級(jí)，可廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選、藥物互作篩選、微生物耐藥篩查、培養(yǎng)條件篩選、陣列PCR、單細(xì)胞分析等領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高通量分析和篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于預(yù)儲(chǔ)存試劑的微體積反應(yīng)篩選多孔板。

技術(shù)背景

組合化學(xué)、生物學(xué)、臨床檢驗(yàn)、藥物學(xué)的反應(yīng)篩查和大規(guī)模樣品分析分選，大多需要手工配制試劑，耗費(fèi)大量試劑和耗材，操作過程中產(chǎn)生的誤差大。針對(duì)這一瓶頸，而發(fā)展起來的預(yù)先加入試劑的多孔板，避免了用戶手工配制大量試劑的溶液操作，使用方便，保證了試劑量的精度，具有重要意義。然而，現(xiàn)有的預(yù)先存儲(chǔ)試劑的多孔板，大多數(shù)為干燥存儲(chǔ)，試劑消耗量較大，成本居高不下，進(jìn)行篩選反應(yīng)需要的樣品體積大，存儲(chǔ)的試劑容易發(fā)生變質(zhì)，多孔板之間容易發(fā)生交叉污染。本發(fā)明創(chuàng)新的提出用油相包裹的微珠試劑，試劑可以以液態(tài)或固態(tài)微珠的形式長期保存，配合自動(dòng)化微量加樣技術(shù)，我們可以將反應(yīng)體系縮小至納升級(jí)別，成本低廉，在諸如藥敏測(cè)試、多位點(diǎn)PCR篩查、細(xì)胞藥物互作篩查、蛋白結(jié)晶篩選等應(yīng)用領(lǐng)域具有廣闊的推廣使用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于微體積反應(yīng)篩選的預(yù)先儲(chǔ)存試劑的多孔板，在多孔板中，預(yù)先在每個(gè)孔中以負(fù)載試劑微珠的形式引入反應(yīng)篩選試劑，同時(shí)添加保護(hù)防揮發(fā)和交叉污染的油性液體，以長時(shí)間穩(wěn)定存儲(chǔ)。這一預(yù)先存儲(chǔ)試劑多孔板在使用時(shí)，配合自動(dòng)化微量加液技術(shù)，即可完成普通多孔板上的微體積反應(yīng)篩選實(shí)驗(yàn)。這一預(yù)先存儲(chǔ)試劑的多孔板，使用方便，試劑消耗量小，可以將常規(guī)篩選反應(yīng)的體積降低2至3個(gè)數(shù)量級(jí)，可長時(shí)間穩(wěn)定保存，有效防止了試劑的氧化變質(zhì)和交叉污染。在蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選、藥物互作篩選、微生物耐藥篩查、培養(yǎng)條件篩選、陣列PCR、單細(xì)胞分析等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

本發(fā)明提供一種以微珠形式預(yù)儲(chǔ)存試劑的多孔板，包括：a)提供預(yù)先儲(chǔ)存試劑的多孔板，所述多孔板的每個(gè)容器中充滿第一種液體；b)所述多孔板的孔內(nèi)預(yù)先引入一個(gè)試劑微珠，試劑微珠與所述第一種液體不互溶；c)所述多孔板可以是開口容器，也可以是封口容器。

進(jìn)一步的，所述的第一種液體包含以下特征：1).比重小于試劑微珠；是油性液體或者與所述步驟c)中與第二種液體互不相溶的液體。進(jìn)一步的，所述的油性液體包括礦物油、液態(tài)烷烴、酯類、硅油、烷烯烴或飽和烴類半液態(tài)混合物等與水相互不相溶且比重小于水的液體。

進(jìn)一步的，所述的烷烯烴或飽和烴類半液態(tài)混合物指其狀態(tài)在常溫時(shí)介于固體及液體之間，熔點(diǎn)在4攝氏度及以上，包括固體石蠟、凡士林。

進(jìn)一步的，所述的試劑微珠，微珠包括固態(tài)微球、液滴或兩者的組合，不參與多孔板使用時(shí)進(jìn)行的反應(yīng)。

進(jìn)一步的，所述的固態(tài)微球包括玻璃微珠，聚合物微球，多孔微球，凝膠微球，磁性微球。

進(jìn)一步的，所述的試劑微珠，試劑是多孔板使用時(shí)參與反應(yīng)的物質(zhì)。

優(yōu)選的，所述的試劑微珠體積范圍為1納升至5微升。

進(jìn)一步的，所述的多孔板包括96孔、384孔、1536孔板及單個(gè)離心管、八聯(lián)管、PCR管，孔板底部包含平底、圓形、錐形及以上任意組合。

本發(fā)明同時(shí)提供了一種簡單可行的制備預(yù)存儲(chǔ)試劑微珠多孔板的方法，其特征在于，所述的篩選試劑水溶液可通過常規(guī)微升體積液體操控技術(shù)批量添加到多孔板上，通過低溫低壓揮發(fā)處理除去水分，使試劑保留在固態(tài)微球、難揮發(fā)溶劑或高分子水溶性物質(zhì)中，實(shí)現(xiàn)利用常規(guī)方法難以操控的微體積負(fù)載試劑微珠的制備。