[發明專利]一種預儲存試劑微珠的多孔板及其制備和使用方法

有效

• 申請號: 201711397425.0
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108267570B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 杜文斌;奕巧蓮
• 申請（專利權）人: 北京達微生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N35/00;B01L3/02
• 代理公司: 北京唐頌永信知識產權代理有限公司 11755
• 代理人: 劉偉

1.一種預儲存試劑微珠的反應篩選多孔板，其特征在于，包括：在多孔板的每個單位容器中充滿第一種液體和一個負載試劑微珠，所述的第一種液體的比重小于負載試劑微珠；所述的負載試劑的微珠體積范圍為1納升至5微升；

所述的第一種液體是油性液體或者是與試劑微珠互不相溶的液體，其包括礦物油、液態烷烴、酯類、硅油、烷烯烴或飽和烴類半液態混合物與水相互不相溶且比重小于水的液體；

所述的試劑微珠包含水、固態微球、難揮發水相溶劑或高分子水溶性物質中任意一種或一種以上的組合，用于固定反應篩選試劑；

所述的難揮發水相溶劑或高分子水溶性物質的混合物，包括聚乙二醇、甘油、羥甲基纖維素、可溶性淀粉、低聚果糖、阿拉伯膠、二甲基亞砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、六甲基磷酰三胺(HMPA)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)；

所述的固態微球包括聚合物微球、二氧化硅微球、多孔微球、凝膠微球、磁性微球；所述的微球直徑為50-1000微米。

2.根據權利要求1所述的多孔板，其特征在于，所述的烷烯烴或飽和烴類半液態混合物指其狀態在常溫時介于固體及液體之間，熔點在4攝氏度及以上，包括固體石蠟、凡士林。

3.根據權利要求1所述的多孔板，其特征在于，所述的多孔板包括96孔、384孔、1536孔板及八聯管、PCR管，其底部包含平底、圓形、U形、錐形，或這些形狀的組合。

4.一種如權利要求1～3中任一項所述的預儲存試劑微珠反應篩選多孔板的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)在多孔板中加入含表面活性劑的第二種液體；

b)通過移液裝置在多孔板的容器的第二種液體中加入試劑以及微珠；

c)離心使試劑以及微珠沉降于容器底部，使兩者接觸；

d)試劑在低溫低壓處理使試劑中的水分以及第二種液體揮發，干燥后的試劑結合在微珠上；

e)在多孔板中加入第一種液體，表面活性劑溶于第一種液體；

f)為多孔板封膜，得到納升體積的預儲存試劑微珠多孔板。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的第一種液體含一種或多種表面活性劑，所述的表面活性劑包括Span20、Span40、Span60、Span80、Tween85、聚甘油脂肪酸酯、烷基叔胺鹽、雙硬脂酸乙酯基羥乙基甲基硫酸甲酯銨、三硬脂酸乙酯基羥乙基甲基硫酸甲酯銨、鯨蠟基聚乙二醇/聚丙二醇-10/1二甲基硅氧烷、油酸二乙醇酰胺的一種或多種。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的第二種液體具有揮發性，為油性液體或者是與試劑微珠互不相溶的液體，包括石油醚、環己烷、環戊烷、異戊烷、正庚烷。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述低溫為-80至50攝氏度，所述低壓指真空度達到0.5至0.05。

8.一種如權利要求1～3中任一項所述的預儲存試劑微珠反應篩選多孔板的使用方法，其特征在于，包括：

a)揭去多孔板封膜；

b)通過微量移液裝置在多孔板的容器的第一種液體中加入樣品液滴；

c)將多孔板置于離心機中離心，使預儲存試劑微珠與樣品液滴沉降于容器底部，與試劑微珠混合反應；

d)重復b)-c)步驟，加入樣品液滴進行多步反應篩選。