[發(fā)明專利]梅毒重組多價(jià)融合抗原、梅毒重組抗原質(zhì)粒和梅毒重組抗原菌株及其制備方法及試劑盒

在審

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• 申請(qǐng)日: 2017-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN108059683A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓雪;屈曉展;崔勇青;胡子穎;高博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/571
• 代理公司: 北京三高永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11138
• 代理人: 呂耀萍

本發(fā)明公開了一種梅毒重組多價(jià)融合抗原、梅毒重組抗原質(zhì)粒和梅毒重組抗原菌株及其制備方法及試劑盒。所述梅毒重組多價(jià)融合抗原的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。所述梅毒重組抗原質(zhì)粒包括如SEQ ID NO:2所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原基因。所述試劑盒包括氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原。該梅毒重組多價(jià)融合抗原所選取的蛋白具有較高的免疫原性，且該梅毒重組多價(jià)融合抗原可以對(duì)所有時(shí)期的梅毒患者血清進(jìn)行有效識(shí)別，同時(shí)，該梅毒重組多價(jià)融合抗原可以對(duì)所有時(shí)期的梅毒患者血清進(jìn)行有效識(shí)別。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種梅毒重組多價(jià)融合抗原、梅毒重組抗原質(zhì)粒和梅毒重組抗原菌株及其制備方法及試劑盒。

背景技術(shù)

梅毒(Syphilis)是由梅毒密螺旋體蒼白亞種(Treponema pallidumsubsp.pallidum，TP)引起的疾病，能導(dǎo)致心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害嚴(yán)重后果。TP的基因組全長(zhǎng)為1138006bp，膜蛋白是梅毒螺旋體的主要抗原，多種膜蛋白對(duì)梅毒具有診斷學(xué)意義。

現(xiàn)階段梅毒確診方法主要采用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(Treponema PallidumParticle Assay，TPPA)檢測(cè)梅毒血清抗體，該檢測(cè)方法在檢測(cè)時(shí)，需要采用梅毒菌體提取物作為抗原，由于梅毒菌體無法在體外培養(yǎng)，這導(dǎo)致梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)的成本很高，每人份的梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)試劑成本近80元。另外，梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)操作步驟繁雜，同時(shí)，需要經(jīng)驗(yàn)豐富的操作人員通過顆粒凝集情況對(duì)判斷結(jié)果進(jìn)行判斷，在顆粒可凝聚但凝聚現(xiàn)象不明顯的情況下，判斷結(jié)果存在較強(qiáng)的主觀性，存在誤判的風(fēng)險(xiǎn)。因此，梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)在我國(guó)各基層醫(yī)院推廣受到限制。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)的成本很高且結(jié)果判斷主觀性強(qiáng)使得判斷結(jié)果存在誤判的風(fēng)險(xiǎn)的問題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種梅毒重組多價(jià)融合抗原、梅毒重組抗原質(zhì)粒和梅毒重組抗原菌株及其制備方法及試劑盒。所述技術(shù)方案如下：

一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種梅毒重組多價(jià)融合抗原，所述梅毒重組多價(jià)融合抗原的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了梅毒重組抗原質(zhì)粒，所述梅毒重組抗原質(zhì)粒包括如SEQ ID NO:2所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原基因。

又一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種制備上述梅毒重組抗原質(zhì)粒的方法，所述方法包括：

將序列如序列表中SEQ ID NO:2所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原基因連接到PET-HIS-28a載體上，得到所述梅毒重組抗原質(zhì)粒。

再一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種梅毒重組抗原菌株，所述梅毒重組抗原菌株包括序列如SEQ ID NO:2所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原基因。

又一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種制備上述梅毒重組抗原菌株的方法，所述方法包括：

將序列如序列表中SEQ ID NO:2所示的梅毒重組多價(jià)融合抗原基因連接到PET-HIS-28a載體上，得到所述梅毒重組抗原質(zhì)粒；

將所述梅毒重組抗原質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，得到所述梅毒重組抗原菌株。

再一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種利用上述梅毒重組抗原菌株制備梅毒重組多價(jià)融合抗原的方法，所述方法包括：

將所述梅毒重組抗原菌株進(jìn)行活化培養(yǎng)；

將活化后的所述梅毒重組抗原菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后，加入誘導(dǎo)劑進(jìn)行表達(dá)培養(yǎng)；

收集所述梅毒重組抗原菌株并進(jìn)行超聲破碎，通過純化后得到所述梅毒重組多價(jià)融合抗原。