[發明專利]一種唐古特大黃查爾酮合酶Rt-CHS1基因、蛋白質及克隆方法

在審

• 申請號: 201711394028.8
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108070575A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 胡延萍;李毅;王莉;王鈞;錢前
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種唐古特大黃查爾酮合酶Rt-CHS1基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的基因，其特征在于，所述基因的開放閱讀框的長度為1179bp。

3.表達權利要求1所述基因的蛋白質，其特征在于，所述蛋白質的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.權利要求1所述基因的克隆方法，包括以下步驟：

1)從唐古特大黃中提取總RNA；

2)以步驟1)得到的總RNA為模板進行反轉錄獲得cDNA；

3)根據蓼科其他植物查爾酮合酶基因序列設計同源引物，以步驟2)得到的cDNA為模板，進行PCR擴增，回收PCR產物；

4)將步驟3)得到的PCR產物測序，獲得Rt-CHS1基因片段；

5)根據步驟4)獲得的Rt-CHS1基因片段設計快速擴增引物，以根據步驟1)中總RNA合成的RACE第一鏈cDNA為模板，進行快速PCR擴增，回收快速擴增PCR產物；

6)將步驟5)得到的快速擴增PCR產物經過檢測、回收、亞克隆和測序，獲得Rt-CHS1基因的3’和5’末端，并將得到的序列進行拼接，得到拼接序列；

7)根據步驟6)所述拼接序列，設計全長cDNA擴增引物，進行全長序列的克隆，得到Rt-CHS1基因。

5.根據權利要求4所述的克隆方法，其特征在于，步驟3)所述同源引物包括3對，其序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

6.根據權利要求4所述的克隆方法，其特征在于，步驟5)所述快速擴增引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

7.根據權利要求4所述的克隆方法，其特征在于，步驟7)所述全長cDNA擴增引物的序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。