[發明專利]一種煙草對煙草鐮刀菌根腐病抗性的鑒定方法

在審

• 申請號: 201711389998.9
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108085363A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 李雪君;孫計平;李芳芳;平文麗;孫煥;李耀宇;丁燕芳;馬彩娟;李旭輝;俎煥新;侯詠;王滿
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 鄭州博派知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41137
• 代理人: 方燕玉

1.一種煙草對煙草鐮刀菌根腐病抗性的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、煙草鐮刀菌病菌培養：首先制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，然后將尖孢鐮刀菌和茄病鐮刀菌分別接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，在25-30℃條件下培養7-14天，0-4℃儲存于冰箱中備用；

步驟二、菌液的制備：取發育成長成熟的菌皿，按照菌餅的重量，每皿加入8-12ml純凈水，在勻漿機中打成勻漿，密封備用；

步驟三、煙苗的培育：將需要鑒定品種的種子，在漂浮盤內播種，間苗，待煙苗長到5-7葉時備用；

步驟四、煙苗的前處理：將步驟三培育的煙苗，選擇生長健壯、大小一致的，從漂盤里面拔出，用水沖掉基質，放入不放基質的空漂盤中；

步驟五、接菌：將兩種病菌按照1:1混均勻，用Hoagland營養液再稀釋到32倍，倒入托盤內；托盤大小要以能放入漂盤為準；將處理好的煙苗，連同漂盤，放入托盤內；調整菌液量和苗入水深度，確保三分之二根系沒入菌液；同時設置對照組，對照組只用營養液，不加菌，其他所有步驟與實驗組相同；

步驟六、調查：浸泡煙苗根部一段時間后，幼苗會出現根部變色，葉面萎蔫等癥狀，參考材料分級標準，將鐮刀菌對煙草幼苗的作用分為以下幾個級別；

“0”無反應：整株煙苗無萎蔫，健康良好；

“1”輕度反應：煙草幼苗側根變色，或老葉下垂；

“3”中度反應：煙草幼苗主根變黃變黑，側根數量不變或新葉下垂；

“5”重度反應：整株煙苗萎蔫；

“7”重度反應：整株煙苗干枯；

病菌接種后第2天開始調查發病情況，隨后，每2天調查一次，連續調查5次；根據發病情況，即可檢測出品種對鐮刀菌根腐病的抗性。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的制作方法為：

將馬鈴薯洗凈去皮，再稱取200-400g切成小塊，加蒸餾水煮20-30分鐘，使馬鈴薯能被玻璃棒戳破即可，用2-6層紗布過濾，濾出馬鈴薯的蒸煮液，向所述蒸煮液中加入10-30g葡萄糖攪拌均勻，稍冷卻后再加蒸餾水定容至1000毫升，得馬鈴薯葡萄糖的混合液，將所述混合液分裝到500ml三角瓶中；2)再將瓊脂加入到所述三角瓶中；高壓115-125℃，滅菌20-30min，無菌條件下分裝于一次性無菌培養皿中，每皿10ml；瓊脂與所述混合液的料液比為15-20g/L。