[發明專利]一種髓過氧化物酶凍干校準品的制備方法及凍干保護液

有效

• 申請號: 201711389466.5
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN108107210B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 段朝暉;羅寧;李民友;藍媛;劉忠貴
• 申請（專利權）人: 廣州市進德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N1/28
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;宋靜娜

本發明公開了一種髓過氧化物酶凍干校準品的制備方法及凍干保護液，所述凍干保護液包括牛血清白蛋白、甘露醇、蛋白穩定劑、聚乙二醇和乙二胺四乙酸二鈉。髓過氧化物酶(MPO)校準品利用本發明的凍干保護液凍干后不縮水，能維持凍干前形狀；不粘瓶；韌性較好；瓶塞不粘凍干粉；凍干品能夠完全溶解，溶液澄清，無塊狀及泡沫產生；凍干前后活性基本保持不變；可以顯著提高髓過氧化物酶校準品的穩定性，有利于凍干抗原的運輸，延長MPO校準品的保存時間，延長MPO檢測試劑盒的保存時間。

技術領域

本發明涉及生化試劑技術領域，具體涉及一種髓過氧化物酶凍干校準品的制備方法及凍干保護液。

背景技術

目前國內髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒中的校準品多為液體，MPO抗原在液態下容易發生變性，雖然加入一些保護劑(如一些蛋白、糖類及抗氧化劑等)能夠延長MPO抗原在液態下的保存時間，但MPO抗原在保護劑存在的情況下放置2-8℃保質期一般為6-12個月。

國內外有部分MPO校準品也有凍干形式存在，凍干后的MPO抗原穩定時間長，準確度高，但價格較高；有部分試劑盒使用的是一個高濃度的MPO凍干校準品，復溶后的高濃度MPO校準品穩定性相對較好，但實驗過程為獲得不同濃度的MPO校準品需要增加稀釋過程，增加了實驗誤差；還有些試劑盒中雖然用到凍干的MPO校準品，但復溶后儲存時間短，2-8℃只能存放2天，-20℃保存30天。

因此總體上，現有技術存在的缺點：

1)MPO抗原中加入的保護劑本身在液態條件下會存在不穩定現象，不能很好地保護MPO抗原；

2)液體的MPO校準品儲存時間相對較短，限制了MPO試劑盒的有效期。

3)液體MPO校準品儲存溫度一般為2-8℃，運輸過程需要使用冰袋或冷鏈運輸，增加了運輸過程的成本。

4)凍干MPO校準品復溶穩定性差；

5)凍干MPO校準品僅在較高濃度下穩定。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供了一種髓過氧化物酶凍干校準品的制備方法及凍干保護液，以解決髓過氧化物酶校準品儲存時間短、運輸不便；凍干品復溶性差的問題。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

一種髓過氧化物酶凍干校準品的凍干保護液，所述凍干保護液包括牛血清白蛋白、甘露醇、蛋白穩定劑、聚乙二醇和乙二胺四乙酸二鈉。

上述凍干保護液中牛血清白蛋白(BSA)具有低溫保護劑和脫水保護劑的作用，能夠對MPO抗原起到很好的保護作用。甘露醇可以作為填充劑，也含有多個羥基，可以替代水與MPO抗原的親水基團形成氫鍵，保護好MPO抗原的空間結構及避免凝聚。蛋白穩定劑對蛋白類的抗原均有保護作用，避免凍干過程及復溶后的活性損失。聚乙二醇能夠提供框架結構，提高凍干后的韌性，有利于維持凍干后的形態。乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)相對于EDTA具有較好的溶解性，能夠鰲合一些金屬離子，避免金屬離子對MPO抗原中氨基酸的氧化。

作為本發明所述的髓過氧化物酶凍干校準品的凍干保護液的優選實施方式，所述聚乙二醇的平均分子量為10000～40000，優選地，所述聚乙二醇的平均分子量為20000。

作為本發明所述的髓過氧化物酶凍干校準品的凍干保護液的優選實施方式，所述凍干保護液包括下述重量百分數的組分：牛血清白蛋白0.5％～3％、甘露醇0.5％～5％、蛋白穩定劑0.1％～1％、聚乙二醇0.2％～2％和乙二胺四乙酸二鈉0.05％～0.4％。

作為本發明所述的髓過氧化物酶凍干校準品的凍干保護液的優選實施方式，所述凍干保護液包括下述重量百分數的組分：牛血清白蛋白1.0％、甘露醇0.5％、蛋白穩定劑0.5％、聚乙二醇0.5％和乙二胺四乙酸二鈉0.2％。