[發明專利]對銅綠假單胞菌-煙曲霉菌混合生物被膜抑制作用的研究方法

在審

• 申請號: 201711388694.0
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN108130358A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發明（設計）人: 孔晉亮;李更森;羅勁;王可;蔡雙啟;陳泉芳;盧樺崧
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12R1/385;C12R1/68
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 任漱晨

1.一種對銅綠假單胞菌-煙曲霉菌混合生物被膜抑制作用的研究方法，其特征在于，該研究方法包括以下步驟：

(1)煙曲霉孢子懸液的制備；

(2)銅綠假單胞菌野生菌株及其缺陷菌株菌液的制備挑取銅綠假單胞菌野生菌株單菌落及銅綠假單胞菌密度感應缺陷菌株單菌落，分別接種于RPMI-1640培養基中，再稀釋；

(3)體外靜止兩種混合生物被膜模型的建立實驗分為6組，依次是煙曲霉菌-野生型銅綠假單胞菌組(A·f+PAO1)，煙曲霉菌-銅綠假單胞菌密度感應缺陷菌組(A.f+P.a lasI/rhlI)，煙曲霉菌組(A.f)，野生型銅綠假單胞菌組(PAO1)，銅綠假單胞菌密度感應缺陷菌組(P.alasI/rhlI)，RPMI-1640培養基作為空白對照組，每組接種于細胞培養板，其中每孔已事先各放置圓形玻璃細胞爬片，再將野生型銅綠假單胞菌液及銅綠假單胞菌密度感應缺陷菌液分別加入相應組中，恒溫孵育；

(4)對于上述步驟(3)中不同生物被膜形成后，進行定量分析。

2.如權利要求1所述的研究方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為：受試煙曲霉菌株接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養基，收集孢子，配置RPMI-1640培養基；將收集到的孢子液加入到該RPMI-1640培養基內，用血細胞計數板調節孢子濃度，作為建立體外混合生物被膜模型的孢子懸液。

3.如權利要求1所述的研究方法，其特征在于，所述步驟(2)中經過稀釋后，上述兩種細菌的終濃度為1×10^{^8}CFU/mL。

4.如權利要求1所述的研究方法，其特征在于，所述步驟(4)中，采用4結晶紫染色法進行定量分析。