[發明專利]一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測的引物和探針以及試劑盒和檢測方法在審
| 申請號： | 201711384063.1 | 申請日： | 2017-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN108179203A | 公開（公告）日： | 2018-06-19 |
| 發明（設計）人： | 劉禮輝;林強;李寧求;付小哲;梁紅茹;趙永亮;胡蕾 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院珠江水產研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 廣州弘邦專利商標事務所有限公司 44236 | 代理人： | 張釔斌 |
| 地址： | 510380 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 氣單胞菌 探針 引物 熒光定量PCR檢測 試劑盒 鱧科 檢測 魚類 病原 簡化操作程序 流行病學調查 定量分析 分子檢測 快速檢測 早期診斷 食物中毒 監測 節約 | ||
1.一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測的引物，其特征在于，所述引物包括：
rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)
rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)。
2.一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測的探針，其特征在于，所述探針包括：
rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。
其中FAM為熒光報告基團，Eclipse為熒光淬滅基團。
3.一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測的引物和探針，其特征在于，包括以下序列：
rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)；
rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)；
rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。
其中FAM為熒光報告基團，Eclipse為熒光淬滅基團。
4.一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1至3中任一所述的引物和探針。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括熒光定量PCR反應液。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光定量PCR反應液包括dNTP、PCR鏈式反應擴增酶、緩沖液。
7.根據權利要求4至6中任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還含有陽性標準品，所述陽性標準品為含有舒伯特氣單胞菌rpoD基因的質粒。
8.一種使用權利要求1至3任一所述的引物和探針或權利要求4至7中任一所述的試劑盒對鱧舒伯特氣單胞菌進行熒光定量PCR檢測的方法，其特征在于，所述方法包括：提取待檢測鱧科魚類的DNA，采用上述引物和探針或試劑盒對DNA進行熒光定量PCR，得到擴增曲線，判斷是否含有鱧舒伯特氣單胞菌。
9.根據權利要求8所述的檢測的方法，其特征在于，所述判斷方法包括：熒光曲線呈S型曲線且Ct值≤37.0，判定為鱧舒伯特氣單胞菌陽性；若無典型S型曲線或Ct值﹥37.0，判定為鱧舒伯特氣單胞菌陰性。
10.根據權利要求9所述的檢測的方法，其特征在于，采用上述方法得到質粒拷貝數X與CT值之間的線性方程為：CT＝-3.326lg X+37.072。
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