[發(fā)明專利]一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物和探針以及試劑盒和檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711384063.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108179203A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉禮輝;林強(qiáng);李寧求;付小哲;梁紅茹;趙永亮;胡蕾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州弘邦專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44236
• 代理人: 張釔斌

本發(fā)明涉及一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物、探針，以及包括該探針和引物的試劑盒，和使用該探針和引物進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)方法，屬于分子檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明可以對(duì)鱧科魚(yú)類的舒伯特氣單胞菌進(jìn)行快速檢測(cè)，可以對(duì)鱧科魚(yú)類的舒伯特氣單胞菌進(jìn)行定量分析，可以簡(jiǎn)化操作程序、節(jié)約成本，對(duì)鱧舒伯特氣單胞菌的流行病學(xué)調(diào)查、病原監(jiān)測(cè)、以及由舒伯特氣單胞菌引起的食物中毒及其早期診斷都具有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物、探針，以及包括該探針和引物的試劑盒，和使用該探針和引物進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)方法，屬于分子檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)，為革蘭氏陰性桿菌，單極鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑,廣泛存在于淡水、海水、土壤、魚(yú)類和脊椎動(dòng)物腸道中。該菌可導(dǎo)致傷口感染、神經(jīng)性肌膜炎，是急性腹瀉的重要致病菌，嚴(yán)重的還會(huì)引起敗血癥，危及生命。在美國(guó)、歐洲及中國(guó)也發(fā)現(xiàn)了大量由舒伯特氣單胞菌引起的食源性疾病的病例。

從2012年開(kāi)始舒伯特氣單胞菌相繼在我國(guó)養(yǎng)殖的鱧科魚(yú)類中分離報(bào)道，且在鱧科魚(yú)類中帶菌率很高，對(duì)鱧科魚(yú)類具有較高的致病力和致死性。

細(xì)菌病病原的鑒定方法多為傳統(tǒng)的分離純化結(jié)合生化及分子生物學(xué)鑒定，但這種方法耗時(shí)長(zhǎng)。而且，我們前期研究發(fā)現(xiàn)，攜帶舒伯特氣單胞菌的鱧或者發(fā)病早期的鱧很難分離到細(xì)菌，阻礙了該病的發(fā)現(xiàn)和積極治療，因此亟需建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)方法，給該病的早期預(yù)警提供技術(shù)支撐。

因此，建立一種快速、敏感、特異的檢測(cè)和鑒定方法為鱧舒伯特氣單胞菌病原的監(jiān)測(cè)、早期預(yù)警、及控制，以及由舒伯特氣單胞菌引起的食物中毒的早期診斷都具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)以上不足，本發(fā)明提供一種特異、敏感、快速的檢測(cè)鱧舒伯特氣單胞菌的熒光定量PCR的引物和探針以及試劑盒和檢測(cè)方法。

本發(fā)明通過(guò)以下方案達(dá)到上述目的：

在本發(fā)明的第一方面，提供一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物和探針。

一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物，所述引物包括：

rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)

rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)。

一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的探針，所述探針包括：

rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。

其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，Eclipse為熒光淬滅基團(tuán)。

進(jìn)一步地，一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的引物和探針，包括以下序列：

rpoD-F：5′-AACATGCGCGAGATGATGGA-3′(SEQ ID NO:1)；

rpoD-R：5′-CGCACTCGTTGTTGGTGAAG-3′(SEQ ID NO:2)；

rpoD-P：5′-(FAM)-GCTCGACACACATCTTCAGG-(Eclipse)-3′(SEQ ID NO:3)。

其中FAM為熒光報(bào)告基團(tuán)，Eclipse為熒光淬滅基團(tuán)。

上述針對(duì)鱧舒伯特氣單胞菌的特異性引物及探針是根據(jù)鱧舒伯特氣單胞菌的rpoD基因的保守區(qū)序列設(shè)計(jì)得到。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種鱧舒伯特氣單胞菌熒光定量PCR檢測(cè)的試劑盒，所述試劑盒包括上述引物和探針。