[發(fā)明專利]一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711380541.1
• 申請日: 2017-12-20
• 公開（公告）號: CN108165590B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發(fā)明（設計）人: 王昊鵬;吳黎明;倪輝;肖安風;趙柳微;杜開書;張中印
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技學院;中國農(nóng)業(yè)科學院蜜蜂研究所;集美大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/68
• 代理公司: 廈門創(chuàng)象知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35232
• 代理人: 賴慶梧

本發(fā)明公開了一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的種子培養(yǎng)基及其發(fā)酵培養(yǎng)基，同時公開了一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的方法，包括以下步驟：步驟一、將所述的煙曲霉接種于所述種子培養(yǎng)基進行菌種的活化，培養(yǎng)基pH值自然；步驟二、將活化的菌種制備單孢子菌懸液接種于所述發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基pH值自然，進行發(fā)酵培養(yǎng)，收集發(fā)酵液中的煙曲霉素。本發(fā)明針對影響煙曲霉素的碳源進行了篩選，意外發(fā)現(xiàn)使用甘油作為碳源可以避免膠霉毒素等副產(chǎn)物的產(chǎn)生，無需后續(xù)進行分離純化，降低了生產(chǎn)成本，便于工廠大規(guī)模化生產(chǎn)。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵工程的技術領域，尤其涉及一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術

煙曲霉素是煙曲霉(Aspergillus fumigatus)發(fā)酵產(chǎn)生的一種重要的次級代謝產(chǎn)物。蜜蜂微孢子蟲病是全球性疾病，它是由蜜蜂孢子蟲寄生在蜜蜂腸上皮細胞所引起的寄生病，受到微孢子蟲侵染的蜜蜂抵抗力變?nèi)酰３Ｒ鹈鄯涓腥径喾N病害如，馬氏管變形蟲病、慢性麻痹病、螺旋體病和白堊病等，一旦發(fā)生給養(yǎng)蜂人帶來不可估量的經(jīng)濟損失。煙曲霉素是美國和加拿大等國家唯一承認并用于蜜蜂微孢子蟲病防治的藥物，使用煙曲霉素防治蜜蜂微孢子蟲病，它雖不殺死蜜蜂微孢子蟲，但能有效遏制微孢子蟲的繁殖蔓延，從而整體上降低了蜂群的感染率，增加蜜蜂及幼蟲的數(shù)量，減少蜂農(nóng)的損失，提高效益。

煙曲霉素作為一種新興的血管抑制劑，在人類醫(yī)學上被用作抗癌抗腫瘤藥物。煙曲霉素抑制血管再生的機制與煙曲霉素生物活性有關的甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(Met AP-2)有關，其作用機理是:煙曲霉素及其類似物通過環(huán)己烷上的環(huán)氧化結(jié)構(gòu)共價地綁定到真核細胞內(nèi)的 Met AP-2 上的活性部位(組氨酸 His231)，導致酶結(jié)構(gòu)被破壞，細胞內(nèi)某些必要的蛋白修飾功能喪失，從而影響靶標生物體內(nèi)的代謝過程。同時研究還發(fā)現(xiàn)以煙曲霉素作為基本骨架合成的煙曲霉醇等，不僅降低了煙曲霉素的毒性，同時也保留了煙曲霉素生物活性。合成的煙曲霉衍生物（TNP-470，PPI-2458，CKD-723)已用于治療人類癌癥的臨床試驗。煙曲霉素及其衍生物TNP-470和CKD-723的使用能減少患者體重、食量和脂肪量，從而有作為減肥藥物的開發(fā)潛力。在藥物開發(fā)上具有很高的潛在價值。

關于煙曲霉代謝生成煙曲霉素的培養(yǎng)方法，國內(nèi)外很少有相關的報道。發(fā)酵生產(chǎn)存著易發(fā)酵、難獲得，發(fā)酵過程不穩(wěn)定等特點，使得煙曲霉素的開發(fā)利用一直都難以進行。公開號為CN106591389A的中國發(fā)明申請，公開了一種利用煙曲霉菌生產(chǎn)煙曲霉素的方法，包括如下步驟：將所述煙曲霉菌接種于GMM固體培養(yǎng)基進行菌種活化，所述GMM培養(yǎng)基pH值為5-7；將活化后的菌種孢子制備孢子懸液后接種于CYA固體培養(yǎng)基、CXMA固體培養(yǎng)基或LMM液體培養(yǎng)基，所述CYA固體培養(yǎng)基、所述CXMA固體培養(yǎng)基pH值自然，所述LMM液體培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5-7，在25℃至37℃條件下培養(yǎng)；收集培養(yǎng)的煙曲霉菌提取煙曲霉素及煙曲霉素衍生物。該發(fā)明針對影響煙曲霉生長及煙曲霉素的碳氮源以及微量元素進行了篩選，并對相應的微量元素濃度進行優(yōu)化，獲得了相對較高的煙曲霉素產(chǎn)量。但是該發(fā)明不足之處是，如其說明書附圖1，在最高峰fumagillin右側(cè)還有明顯的雜峰，說明有其他副產(chǎn)物的產(chǎn)生，后續(xù)還需對其分離純化，增加了工藝難度。

有鑒于此，本發(fā)明人研究和設計了一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，本案由此產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種煙曲霉發(fā)酵產(chǎn)煙曲霉素的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術問題所采取的技術方案是：