[發明專利]發酵生產二十二碳六烯酸的改進方法

在審

• 申請號: 201711379908.8
• 申請日: 2010-02-24
• 公開（公告）號: CN108034680A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 奈克旭·拉特蘭;桑迪普·奧羅拉;蘇倫德拉·塔盧里;艾拉潘·甘尼森;維尼塔·皮特
• 申請（專利權）人: V.B.醫療私人有限公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;李娟娟

1.在高含氧條件下由破囊壺菌目微生物(Thraustochytriales)生產多不飽和脂肪酸的方法，其包括分批發酵、半連續發酵或連續發酵，且包括以下步驟：

通過最初增加攪拌器攪拌頭速度至高達3.2m/sec來保持溶解氧水平為20-30％；在發酵后期，溶解氧開始下降，除了以所述攪拌頭速度進行攪拌還通過將發酵罐切換到氣體混合模式來恢復所述溶解氧水平，其中將純氧與空氣混合并噴入發酵罐的發酵液中，以阻止所述溶解氧下降到低于目標水平，所述目標水平在整個發酵過程中為15％飽和度或以上。

2.根據權利要求1所述的方法，其包括分批發酵，其中通過保持發酵液中的溶解氧為至少20％，獲得的DHA產量大于10g/L。

3.根據權利要求1所述的方法，其中在分批發酵中，添加無機氮，并補充添加來自含氨基化合物的有機氮。

4.根據權利要求3所述的方法，其中在分批發酵中，來自所述含氨基化合物的有機氮包括尿素、富含蛋白的來源或富含肽的來源或者氨基酸。

5.根據權利要求4所述的方法，其中在分批發酵中，所述富含蛋白的來源包括脫脂大豆粉。

6.根據權利要求1所述的方法，其包括添加消泡劑。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述半連續發酵包括以下步驟：

a.在第一發酵罐中，使一批發酵液發酵達到其中微生物在對數生長期處于活躍分裂狀態的點，

b.在第一發酵罐中保留一部分發酵液，其體積足以給下一批發酵液提供活躍分裂的接種物，無菌轉移其余的活性發酵液至第二反應器中，

c.向第一反應器中加入無菌發酵液以恢復其體積，并使第一反應器進行步驟(a)并重復該步驟所需的次數，或(i)允許步驟(d)平衡體積或(ii)通過向第一反應器中加入無菌發酵液以恢復其體積，并使其完成進一步的生長和脂質生產，所述脂質將在結束該系列半連續生產時收獲，

d.為第二發酵罐中的發酵液提供培養條件，發揮其由于養分供給而受到限制的分裂潛力，從而生產DHA，

e.回收DHA。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述連續發酵包括以下步驟：

a.在第一發酵罐中，使一批發酵液發酵達到其中微生物在對數生長期處于活躍分裂狀態的點，

b.采取預防措施避免污染物進入，開始向第一發酵罐中加入無菌發酵液，并允許無菌排出或移出相同體積的發酵液至第二發酵罐中，移出速率為使第一反應器的內容物始終保持在對數生長期，

c.為第二發酵罐中的發酵液提供培養條件，發揮其由于養分供給而受到限制的分裂潛力，從而生產DHA，

d.第二發酵罐達到其發酵能力后，從第二發酵罐中無菌排出或移出超過其能力的發酵液，

e.立即回收DHA或隔一段時間后回收DHA。

9.根據權利要求1所述的方法，其中用于發酵的破囊壺菌目微生物是破囊壺菌(Thraustochytrid)或裂殖壺菌(Schizochytrium)。

10.根據權利要求6所述的方法，其中所述消泡劑為有機硅消泡劑。

11.根據權利要求1所述的方法，其包括達到10g/L或更高的高DHA產量。