[發明專利]一種乙酰氨基葡萄糖偶聯物的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201711379358.X
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109879967A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 李振軍;陳菲
• 申請（專利權）人: 蘇州和銳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/44;G01N33/68
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本發明公開一種式I乙酰氨基葡萄糖偶聯物及應用，屬于免疫學檢測技術領域。本發明的技術方案是把式I結構的乙酰氨基葡萄糖與含?COOH的載體物質通過脫水縮合反應，形成乙酰氨基葡萄糖偶聯物。通過上述方法獲得的乙酰氨基葡萄糖偶聯物可用于制備抗乙酰氨基葡萄糖抗體，以及應用于免疫方法檢測樣品中的抗乙酰氨基葡萄糖抗體。用本發明獲得的乙酰氨基葡萄糖偶聯物制備抗乙酰氨基葡萄糖抗體檢測試劑，具有靈敏度高、特異性強、性能穩定等優點。

技術領域

本發明涉及一種式I乙酰氨基葡萄糖偶聯物及應用，具體涉及乙酰氨基葡萄糖偶聯物結構、制備方法，以及在制備抗乙酰氨基葡萄糖抗體檢測試劑中的應用。屬于免疫學技術領域。

背景技術

微生物細胞壁多糖在一些自體免疫性疾病的發生發展過程中起重要作用，這些自體免疫性疾病患者的血清中能檢測到多種多糖的抗體。其中抗釀酒酵母細胞壁多糖IgA(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin A，ASCA-IgA)和抗釀酒酵母細胞壁多糖IgG (anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin G，ASCA-IgG)是被臨床廣泛認可的克羅恩病的特異性指標。乙酰氨基葡萄糖是釀酒酵母細胞壁多糖的組分之一，不排除克羅恩病特異性指標ASCA中含有乙酰氨基葡萄糖抗原表位。迄今為止，在臨床應用的釀酒酵母細胞壁多糖抗原是天然結構的糖蛋白，其中包含了三種不同糖苷鍵連接的甘露多糖，以及與乙酰氨基葡萄糖以beta-1，4糖苷鍵連接的乙酰氨基葡萄糖。由于ASCA檢測試劑的各廠家原料來源不同，抗原表位的暴露程度不同，質控難度大，檢測結果差異顯著。為此，以色列科學家發明了用乙酰氨基葡萄糖作為抗原的乙酰氨基葡萄糖二糖anti-chitobiosidecarbohydrate IgA antibodies(ACCA)以及乙酰氨基葡萄糖多聚糖為抗原的anti-chitinIgA antibodies(anti-C)檢測試劑。對比文獻US2008/0085838A1公布了乙酰氨基葡萄糖寡糖基與固相載體偶聯的方法，其是通過活化1號位-OH與固相載體偶聯，這種方法的缺陷是無法保證只跟1號位-OH偶聯，如果跟其他位的-OH偶聯，會影響與抗體結合，對試劑的穩定性造成顯著影響，前期研究發現商品化的ACCA。而且1號位的偶聯步驟繁瑣、效率低下，最終試劑穩定性差。

此外，目前ACCA和anti-C的檢測主要是ELISA，該方法檢測時間長，不適合門診快速檢測，臨床上需要更便捷、快速的檢測技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種乙酰氨基葡萄糖偶聯物，及其在檢測抗乙酰氨基葡萄糖抗體中的應用。

本發明的第一方面，提供一種式I所示乙酰氨基葡萄糖偶聯物的結構，其中一個糖基的2 號位-NH2上通過肽鍵連接載體物質。所述乙酰氨基葡萄糖偶聯物比對比文獻公布的在1號位偶聯具有操作簡單、性能穩定、特異性高、不破壞抗原表位等優點。

本發明的第二方面，提供一種乙酰氨基葡萄糖偶聯物的制備方法，包括以下步驟：

1)與生物素反應

①取生物素、二環己基碳二亞胺(DCC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶于DMF中，室溫磁力攪拌反應，離心收集上清液；

②取式I乙酰氨基葡萄糖溶于磷酸緩沖液中；

③將①中溶液攪拌下逐滴加入到②所得溶液中，攪拌反應；

④緩沖液透析，得到偶聯物。

2)與蛋白質、蛋白質片段、合成多肽或半合成多肽反應

取蛋白質、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和式I乙酰氨基葡萄糖溶于DMF中，攪拌反應；緩沖液透析，得到偶聯物。