[發(fā)明專利]測定生物樣品中丙酮酸乙酯及其代謝物丙酮酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711378269.3
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108169370B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭繼芬;楊瑩;李照豐
• 申請（專利權(quán)）人: 萬舒（北京）醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及測定生物樣品中丙酮酸乙酯及其代謝物丙酮酸的方法，方法使用紫外檢測的高效液相色譜法，其可簡稱為LC?UV法或者HPLC?UV法，以生物樣品中的丙酮酸含量為檢測指標(biāo)，用從未給予丙酮酸乙酯的生物體獲得的生物樣品中內(nèi)源性丙酮酸含量為本底，測定從給予丙酮酸乙酯的生物體獲得的生物樣品中代謝性丙酮酸含量，進而測定丙酮酸乙酯在生物體內(nèi)的動力學(xué)。本發(fā)明建立的HPLC?UV法，選擇性強、操作簡單、分析時間快，特別地適用于丙酮酸乙酯藥代動力學(xué)或者毒代動力學(xué)研究中大批量血漿樣品的分析。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種可靠的方法用以測定生物體例如大鼠給予丙酮酸乙酯后生物樣品例如血中的丙酮酸乙酯及其代謝物丙酮酸的含量，以評估丙酮酸乙酯在體內(nèi)的行為。特別地，本發(fā)明涉及一種測定生物樣品例如大鼠血漿中丙酮酸乙酯及其代謝物丙酮酸的方法。本發(fā)明建立的HPLC-UV法，選擇性強、操作簡單、分析時間快，特別地適用于丙酮酸乙酯藥代動力學(xué)或者毒代動力學(xué)研究中大批量血漿樣品的分析。

背景技術(shù)

丙酮酸乙酯(Ethyl Pyruvate，簡稱EP)是丙酮酸的酯化物，是一種具有芳香氣味的油狀化合物。人們最開始認識到丙酮酸乙酯的藥理作用源于對丙酮酸的研究。早在1904年，Holleman[Brand K.Aerobic glycolysis by proliferating cells:protectionagainst oxidative stress at the expense of energy yield[J].J BioenergBiomembr，1997，29(4):355-364]就發(fā)現(xiàn)了丙酮酸能消除內(nèi)源性的H2O2，具有抗氧化作用。人們對于丙酮酸乙酯藥理作用的認識也是源于它的抗氧化作用[施宏，梁偉民.丙酮酸乙酯的抗炎作用及機制[J].復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2012，39(3)：309-312]。隨著研究的深入，人們又陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了丙酮酸乙酯抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤、抗膿毒等其他藥理作用[喬京貴，趙中夫.丙酮酸乙酯的抗炎作用研究進展[J].長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，19(4):318-320；王浩，何義舟，羅哲.丙酮酸乙酯對肝細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用及其機制研究[J].中國臨床醫(yī)學(xué)，2015，22(2):195-198；梁旭陽，程寶泉，賈俊英，等.丙酮酸乙酯對人胰腺癌細胞的抑制作用[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2011，49(5):48-53；馬艷梅，霍正祿，梅冰，等.丙酮酸乙酯對膿毒癥大鼠血清HMGB1表達的影響及其作用的研究[J].中國急救醫(yī)學(xué)，2009，29(5)：442-445]，是一種非常具有研究前景和藥用價值的小分子藥物。

目前，已有文獻報道關(guān)于HPLC-UV法測定微囊制劑中[李延志，孫昱，張春枝.丙酮酸乙酯的微囊化與微囊中含量檢測[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(36):20518-20520]丙酮酸乙酯的含量，以及氣相色譜法測定丙酮酸乙酯注射液中丙酮酸乙酯的含量[王曉云，毛發(fā)燕，王小剛.GC法測定丙酮酸乙酯的含量[J].中國藥師，2016，19(5)：1021-1023；彭潔，王釗，李曉曄.GC法測定丙酮酸乙酯注射液中EP的含量[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2012，12(15)：2822-2825]。另已有文獻報道HPLC-UV法測定發(fā)酵液中[高年發(fā)，吳迪，張健.反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定丙酮酸發(fā)酵液中丙酮酸[J].天津科技大學(xué)學(xué)報，2006，21(l)：21-24]、葡萄酒中[陳學(xué)詩，王越，安家彥.HPLC和分光光度法測定葡萄酒中丙酮酸[J].食品工業(yè)，2015，36(8)：290-292]以及殼聚糖納米粒中[徐鳳娥，趙兵新，孫樹茂.反相高效液相色譜法測定殼聚糖納米粒中丙酮酸乙酯的含量[J].中國組織工程研究，2014，18(8)：1205-1210]丙酮酸的含量。

但是，目前尚未有關(guān)于測定生物樣品中丙酮酸乙酯或其代謝產(chǎn)物丙酮酸含量方法的報道。

在丙酮酸乙酯的制劑開發(fā)過程中，需要對丙酮酸乙酯的體內(nèi)行為進行評價，典型的臨床前工作包括藥代動力學(xué)和毒代動力學(xué)評價，以及后續(xù)的臨床階段的藥物體內(nèi)行為評價。這些體內(nèi)行為評價都將涉及到生物樣品例如血漿樣品中丙酮酸乙酯或其代謝產(chǎn)物丙酮酸的含量測定。