[發明專利]一種用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201711378140.2
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108220416B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 李繼承;劉昌銘
• 申請（專利權）人: 李繼承
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 張擁

本發明公開了一種用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒，屬于血清生物學標志物領域。所述試劑盒包括3條血清miRNA的PCR引物。本發明提供的用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒，采用3條血清miRA作為診斷標志物，并通過對上述標志物進行定量，鑒別陰虛上火體質，可以代替傳統望、聞、問、切的中醫診斷方法，將中醫證候的診斷與現代分子生物學相結合，達到診斷的標準化；并且該用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒，通過對3條血清miRNA同時定量，鑒別陰虛上火體質，診斷的靈敏度達到95.7%、特異性達到73.6%，并且高于單個miRNA的診斷特性。

技術領域

本發明涉及血清生物學標志物領域，具體涉及一種用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒及其應用。

背景技術

陰虛上火是一種常見的亞健康狀態，表現為口干舌燥、目干澀痛、大便干結、心煩易怒，或伴有復發性口舌生瘡、牙齦腫痛、咽喉腫脹等炎性癥狀，俗稱上火。陰虛上火雖然尚未達到疾病的臨床診斷標準，但作為一種亞健康狀態嚴重影響人們的正常生活與工作，降低生活質量。據報道，陰虛上火體質主要發生在工作、學業壓力較大的公司白領和大學生群體中。15至30歲年齡段人群陰虛上火的發生率遠遠高于其他年齡段，陰虛上火體質的診斷、預防與治療尤為重要。目前，臨床判斷陰虛上火的主要方法是通過問診并且觀察舌象、脈象進行，缺乏量化的診斷指標。

系統生物學的特點是整體性、時效性，與中醫學整體觀念、辯證施治的思想較為一致，系統生物學技術的發展為中醫學中復雜生命現象的研究提供了可行條件。miRNA穩定存在于血清和血漿中，適合作為疾病的候選生物學標記物，而且從血清中尋找疾病生物標志物一直以來是人們研究的熱點，但是miRNA用于中醫證候的生物學標志物還鮮有報道。miRNA測序是系統生物學的一種重要手段，其目的在于發現對基因轉錄調控有重要作用的全部miRNA，可以通過篩選并鑒定與陰虛上火體質相關的miRNA，應用生物信息學方法構建與基因、miRNA以及蛋白的網絡聯系，對陰虛上火的本質作出全面解釋。

因此，研究一種能夠檢測與陰虛上火體質相關的miRNA的試劑盒具有重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提出一種用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒及其應用，該試劑盒能夠代替傳統的中醫診斷方法，將中醫證候的診斷與現代分子生物學相結合，達到診斷的標準化，具有靈敏度高、特異性高的特點。

基于上述目的，本發明提供的一種用于檢測陰虛上火體質血清特異性miRNA的試劑盒，所述試劑盒包括3條血清miRNA的PCR引物，3條血清miRNA分別為hsa-miR-221-3p、hsa-miR-30b-5p和hsa-miR-142-3p，所述3條血清miRNA的PCR引物包括hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物；

所述3條血清miRNA的PCR引物序列分別如下所示：

hsa-miR-221-3p的引物：5’-GCGCAGCTACATTGTCTGCTGGGTTTC-3’，

hsa-miR-30b-5p的引物：5’-CGCGCGTGTAAACATCCTACACTCAGCT-3’，

hsa-miR-142-3p的引物：5’-CCGCGTGTAGTGTTTCCTACTTTATGGA-3’。

本發明中，3條血清miRNA的PCR引物即hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物由發明人自己設計，并委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成；3條血清miRNA的序列分別如下所示：

hsa-miR-221-3p：AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC