[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711378140.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN108220416B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李繼承;劉昌銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李繼承
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 張擁

1.一種用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒包括3條血清miRNA的PCR引物，3條血清miRNA分別為hsa-miR-221-3p、hsa-miR-30b-5p和hsa-miR-142-3p，所述3條血清miRNA的PCR引物包括hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物；

所述3條血清miRNA的PCR引物序列分別如下所示：

hsa-miR-221-3p的引物：5’-GCGCAGCTACATTGTCTGCTGGGTTTC-3’，

hsa-miR-30b-5p的引物：5’-CGCGCGTGTAAACATCCTACACTCAGCT-3’，

hsa-miR-142-3p的引物：5’-CCGCGTGTAGTGTTTCCTACTTTATGGA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒還包括1條內(nèi)參miRNA的PCR引物，內(nèi)參miRNA為hsa-miR-16-5p；所述內(nèi)參miRNA的PCR引物序列為5’-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒還包括RNA提取液、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、熒光定量RT-PCR反應(yīng)液和小RNA吸附柱。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述RNA提取液包括裂解液、去蛋白液、漂洗液、氯仿、無水乙醇和無RNA酶雙蒸水；

所述反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液包括反轉(zhuǎn)錄酶和反轉(zhuǎn)錄緩沖液，所述反轉(zhuǎn)錄酶包括E.coliPoly(A)Polymerase、RTase和RNasin；

所述熒光定量RT-PCR反應(yīng)液包括Master mix、通用下游引物和無RNA酶雙蒸水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系以20.0μL計(jì)包括：

總RNA：8.0μL；

反轉(zhuǎn)錄緩沖液：10.0μL；

反轉(zhuǎn)錄酶：2.0μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑盒在制備檢測(cè)陰虛上火體質(zhì)血清特異性miRNA的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系以10.0μL計(jì)為：

cDNA模板：2.5μL；

Master Mix：5μL；

miRNA上游引物：0.5μL；

通用下游引物：0.5μL；

無RNA酶雙蒸水：1.5μL；

其中，所述miRNA上游引物的濃度為10μM，所述miRNA上游引物為hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物、hsa-miR-142-3p的PCR引物或hsa-miR-16-5p的PCR引物。