[發明專利]一種脾氨肽內多肽的提取方法

有效

• 申請號: 201711377944.0
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108129549B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 李起豎;李一釗;盧進軍;盧麗琴;金潔
• 申請（專利權）人: 浙江豐安生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/16;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 邢永

1.一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于，包括以下步驟

步驟一，試劑配制，配制流動相A、流動相B，流動相A內溶劑為水、溶質為質量百分比濃度為0.1％的甲酸，流動相B內溶劑為乙腈、溶質包括質量百分比濃度為0.1％的甲酸和質量百分比濃度為0.1％的環己醚；

步驟二，樣品處理，將脾氨肽加入到起始流動相中，得到樣品溶液；

步驟三，分離純化，色譜條件：色譜柱選用Agilent Poroshell 300SB-C18，色譜柱內填料顆粒為多孔硅膠，填料顆粒直徑為5μm，色譜柱內徑為2.1mm，柱長為75mm，柱溫40℃，梯度洗脫0min-13min-13.5min-26min-35min,流動相B 5％-11.2％-15.8％-36％-60％；流速0.5ml/min，進樣體積為20μL，檢測波長214nm，收集出峰時間為16.060-16.462min、23.072-24.022min、29.968-31.451min的色譜峰，得到分離出來的多肽。

2.根據權利要求1所述的一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于：還包括步驟四，冷凍干燥，對步驟三得到的多肽冷凍干燥處理，得到凍干粉。

3.根據權利要求1所述的一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于：步驟二，樣品處理，用透析袋對脾氨肽原液進行透析，將透析后的脾氨肽原液內加入起始流動相，用0.22μm有機膜過濾，得到樣品溶液。

4.根據權利要求3所述的一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于：步驟二，樣品處理中，每500μL脾氨肽原液內加入200μL起始流動相。

5.根據權利要求1所述的一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于：步驟二，樣品處理，取脾氨肽原液離心，離心條件為：12000rpm、10min、4℃，離心后取上清液，加入到起始流動相內，用0.22μm有機膜濾過，得到樣品溶液。

6.根據權利要求5所述的一種脾氨肽內多肽的提取方法，其特征在于：步驟二中每600μL上清液加入到 100μL起始流動相。