[發(fā)明專利]一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽、制備方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711376789.0
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108059658A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 時連根;沈張飛;蔣學(xué);費建明
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/06;C07K17/08;C12N15/85;A01K67/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林超

本發(fā)明公開了一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽、制備方法及應(yīng)用。依照序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa，從C端(羧基端)向N端(氨基端)進行合成家蠶滯育激素多肽；采用熒光素酶報告基因法檢測合成的家蠶DH多肽活性；將家蠶DH活性多肽液過濾膜除菌，注射入每代均產(chǎn)非滯育卵的多化性品種家蠶化蛹后2?3天的雌蠶蛹腹部，化蛾后正常交配，產(chǎn)下滯育卵。本發(fā)明讓多化性品種家蠶產(chǎn)滯育卵，對于研究家蠶胚胎滯育機制、進一步利用家蠶胚胎滯育進行傳統(tǒng)養(yǎng)蠶業(yè)的技術(shù)革新與經(jīng)濟效益提高等，具有積極作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及了一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽、制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

滯育(Diapause)是昆蟲在個體發(fā)育的某個特定階段主動停止發(fā)育的一種現(xiàn)象，它作為一種遺傳特性，在昆蟲的生存、進化、繁榮等中發(fā)揮著重要的作用。家蠶(Bombyx mori)為卵滯育型，多化性(polyvoltine)品種蠶每代都產(chǎn)非滯育卵。非滯育卵不但不易保存而十分不利于蠶種生產(chǎn)，而且非滯育性品種蠶的經(jīng)濟性狀差。所以對家蠶滯育現(xiàn)象的研究，一直為人們所關(guān)注。

蠶卵是否發(fā)生滯育，主要取決于蛹期由咽下神經(jīng)節(jié)(Subpharyngeal ganglion，SG)合成和分泌的滯育激素(Diapause hormone，DH)作用。當(dāng)合成和分泌的DH作用于卵巢和發(fā)育中蠶卵，引起多種基因表達上調(diào)，從而改變蠶卵內(nèi)的物質(zhì)代謝，成為滯育卵；反則蠶卵胚胎不停地向前發(fā)育，在產(chǎn)下后約經(jīng)10d左右便形成幼蟲而孵化，成為非滯育卵。但有關(guān)家蠶DH是通過怎樣的方式傳遞滯育信號，來調(diào)控家蠶卵滯育等，均缺乏研究。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決背景技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽、制備方法及應(yīng)用，是采用家蠶DH多肽的合成，合成程度、純度和活性的分析檢測，再給雌蠶蛹腹部注射的方法，通過家蠶DH的調(diào)控作用，讓多化性品種家蠶產(chǎn)滯育卵。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一、一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽：所述多肽的氨基酸序列如SEQID No.1，即為TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa。

本發(fā)明構(gòu)建如SEQID No.1的氨基酸序列TDMKDESDRGAHSERGALWFG PRLa，從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成家蠶滯育激素(DH)多肽。

二、一種讓多化性家蠶產(chǎn)滯育卵的多肽的制備方法：

1)將序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa中的每一個氨基酸預(yù)先用9-芴甲氧羰基(Fmoc)基團對α-氨基進行保護處理；

2)耦聯(lián)反應(yīng)：按氨基酸序列將一個已保護的氨基酸通過對烷氧芐醇支臂共價連接到不溶性的對烷氧芐醇型樹脂固相載體上，得到氨基酸--支臂--樹脂；

3)脫保護和耦聯(lián)反應(yīng)：用90％質(zhì)量分數(shù)的三氟乙酸(TFA)溶液對步驟2)獲得的氨基酸--支臂--樹脂進行處理，脫掉α-氨基上的9-芴甲氧羰基(Fmoc)基團，再用90％質(zhì)量分數(shù)的三氟乙酸(TFA)溶液洗滌氨基酸--支臂--樹脂，然后用下一個已保護的氨基酸重復(fù)步驟2)進行耦聯(lián)反應(yīng)連接到對烷氧芐醇型樹脂固相載體上；

4)重復(fù)步驟2)～3)按照序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa的氨基酸順序?qū)ζ渲械娜堪被嵋来芜B接到對烷氧芐醇型樹脂固相載體上，得到目的多肽；

5)用氟化氫(HF)對目的多肽進行處理，水解肽鏈和固相載體之間的酯鍵，得到多肽合成液即家蠶DH多肽合成液。

所述多肽合成液中不含游離氨基，多肽合成液中的所述多肽純度在95％以上。

具體實施采用茚三酮顯色法檢測合成的家蠶DH多肽合成液，檢測不到游離氨基，確保氨基酸之間連接完全。