[發明專利]3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體

在審

• 申請號: 201711376257.7
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108048414A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 宮春杰;顧昌祺;薛棟升;王崇鞠;胡征
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C07K16/40
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及一種3?磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體。3?磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，包括步驟：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3?磷酸甘油醛脫氫酶為抗原，免疫小鼠制備抗血清；2)純化抗血清得到3?磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體。本發明利用PCR技術在喜冷桿菌屬Cryobacterium中擴增得到3?磷酸甘油醛脫氫酶基因，并通過基因工程技術得到Ecoli BL21?pET21a?GPR重組菌株，誘導表達重組菌株得到3?磷酸甘油醛脫氫酶蛋白，該蛋白具有較好的低溫耐受，而且以3?磷酸甘油醛脫氫酶為抗原成功得到3?磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體，該多克隆抗體能夠準確檢測3?磷酸甘油醛脫氫酶。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及一種3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體。

背景技術

3-磷酸甘油醛脫氫酶，英文名(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPD)。3-磷酸甘油醛脫氫酶，它可以催化3-磷酸甘油醛氧化(脫氫)和磷酸化，生成1，3-二磷酸甘油酸，是糖代謝的中心環節，故對糖代謝起著重要的作用。3-磷酸甘油醛脫氫酶廣布于人體各組織器官，脂肪組織含量較低，肺含酶量約為脂肪組織的10倍，肝、心含量相近，約為脂肪組織的30倍，以骨骼肌、紅細胞和腎中的含量最為豐富。急性肝炎、酒精性肝病、肝硬變等可致血清GAPD總活性升高。慢性腎盂腎炎、多發性骨髓病、肺炎、肺氣腫等病人血清GAPDA活性呈不同程度的升高。

3-磷酸甘油醛脫氫酶的應用前景十分廣闊，它是糖代謝的中心環節，對糖代謝起著重要的作用，而對于體內缺乏此酶，糖代謝有問題的病人，通過食用含有此酶的藥物，可以使病情得以緩解，治療。該酶還分布于人體各組織器官故通過對3-磷酸甘油醛脫氫酶的活性檢測就可以推斷是否患有此類病，對于疾病的預防有著很大作用。

提取3-磷酸甘油醛脫氫酶的傳統方法是將將酵母與其他試劑混合，經過破壁、離心、收集破壁液、干燥、除雜等步驟，十分繁瑣，復雜。

目前隨著基因工程技術的快速發展，利用微生物生產3-磷酸甘油醛脫氫酶越來越受到研究者的關注，如申請號為201710247131.3的中國發明專利公開了一種互花米草甘油醛3-磷酸脫氫酶SaGAPDH及其編碼基因與應用，該互花米草甘油醛3-磷酸脫氫酶SaGAPDH可以催化甘油醛3-磷酸產生1,3-二磷酸甘油酸，而且表達互花米草甘油醛-3-磷酸脫氫酶SaGAPDH的E.coli重組表達菌株與對照菌株相比，提高了耐鹽性。又如文獻“張詠莉，吳德，余新炳，華支睪吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶重組蛋白的純化、酶學活性及免疫學研究，《中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志》,2005,23(4):231-235”中記載了體外制備華支睪吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶重組蛋白(CsGAPDH)，分析其酶學活性及免疫學特性。利用基因工程的方法獲取表達重組質粒pGEX-4T-1-GAPDH，并且表達得到華支睪吸蟲3-磷酸甘油醛脫氫酶重組蛋白(CsGAPDH)，最后利用重組蛋白(CsGAPDH)免疫小鼠得到多抗。以上兩種3-磷酸甘油醛脫氫酶的制備方法均采用基因工程技術，前者得到的3-磷酸甘油醛脫氫酶重組蛋白具有耐鹽特性，后者利用3-磷酸甘油醛脫氫酶重組蛋白作為抗原得到多抗，為3-磷酸甘油醛脫氫酶可作為華支睪吸蟲病診斷候選抗原提供了免疫學依據。但是以上3-磷酸甘油醛脫氫酶的基因均來自植物和寄生蟲，其來自于細菌的3-磷酸甘油醛脫氫酶比較少見。

發明內容

為解決以上問題，本發明提供一種3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體。得到了來源于細菌中的3-磷酸甘油醛脫氫酶，而且該3-磷酸甘油醛脫氫酶具有低溫酶的特性，制備得到3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體，能夠準確檢測3-磷酸甘油醛脫氫酶。

本發明的目的之一是提供一種3-磷酸甘油醛脫氫酶的氨基酸序列；所述3-磷酸甘油醛脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明的目的之二是提供一種編碼3-磷酸甘油醛脫氫酶基因的堿基序列；所述3-磷酸甘油醛脫氫酶基因的堿基序列如SEQ ID NO.2所示。