[發明專利]3-磷酸甘油醛脫氫酶及其多克隆抗體

在審

• 申請號: 201711376257.7
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108048414A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 宮春杰;顧昌祺;薛棟升;王崇鞠;胡征
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C07K16/40
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平

1.一種3-磷酸甘油醛脫氫酶，其特征在于：所述3-磷酸甘油醛脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種編碼權利要求1所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的基因，其特征在于：所述3-磷酸甘油醛脫氫酶基因的堿基序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體，其特征在于：所述多克隆抗體的抗原為SEQID NO.1所示氨基酸序列組成的多肽。

4.一種制備權利要求3所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3-磷酸甘油醛脫氫酶為抗原，免疫小鼠制備抗血清；

2)純化抗血清得到3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體。

5.根據權利要求4所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述3-磷酸甘油醛脫氫酶的制備方法為：

1.1)利用PCR技術擴增SEQ ID NO.2所示的堿基序列；

1.2)將SEQ ID NO.2所示的堿基序列克隆入載體質粒中，構建3-磷酸甘油醛脫氫酶的表達載體；

1.3)將表達載體轉化入大腸桿菌感受態菌體中得到重組菌體，依次經擴大培養、誘導表達、收集菌體、破碎菌體和純化蛋白過程得到3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白。

6.根據權利要求4所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述純化抗血清的方法為：將3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白與Ni-NTA偶聯制備成抗體純化層析柱，再將待純化的抗血清與PBS按照1:1比例混合后經過抗體純化層析柱，待抗血清中的抗體與3-磷酸甘油醛脫氫酶蛋白結合完全后用甘氨酸洗脫緩沖液洗脫，獲得純化的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體。

7.根據權利要求5所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.1)中，PCR技術擴增所用的引物為：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

8.根據權利要求5所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.2)中載體質粒為pET21a(+)。

9.根據權利要求5所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.3)中，大腸桿菌感受態菌體為大腸桿菌BL21感受態菌體。

10.根據權利要求5所述的3-磷酸甘油醛脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.3)中，所述純化蛋白過程中利用Ni-NTA親和層析色譜柱進行蛋白純化。